上海瑞諾生物科技有限公司

蘇州瑞特佰生物科技有限公司

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致力于為生物醫(yī)藥領(lǐng)域

提供高品質(zhì)的試劑產(chǎn)品

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蛋白重組試劑 產(chǎn)品技術(shù)手冊 Protein recombination reagent

01 01

T

R

COMPANY

2020

e

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DEDICATED TO THE BIOMEDICAL FIELD

PROVIDE HIGH QUALITY REAGENT PRODUCTS 目錄 CONTENTS

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我們專注于生物醫(yī)藥研發(fā)及質(zhì)量控制相關(guān)配套試劑

的研發(fā)和生產(chǎn)，擁有專業(yè)知識扎實的市場人員，訓

練有素的技術(shù)支持團隊，核心研發(fā)團隊和管理團隊

在生物醫(yī)藥領(lǐng)域有著二十多年的從業(yè)經(jīng)驗，熟悉國

內(nèi)外生物醫(yī)藥行業(yè)法規(guī)，深刻理解生物醫(yī)藥研發(fā)、

評價與分析配套產(chǎn)品的客戶需求、運用場景和技術(shù)

標準。

公司現(xiàn)有重組C因子內(nèi)毒素檢測試劑盒、蛋白表征

相關(guān)糖苷酶和蛋白酶、細胞活性檢測試劑等眾多

品，旗下“Rhinogen”系列產(chǎn)品已服務(wù)數(shù)百家生

物醫(yī)藥公司、CRO公司、CDMO公司及高校，是

生物分析領(lǐng)域的專業(yè)供應(yīng)商。

致力于為生物醫(yī)藥領(lǐng)域

提供高品質(zhì)的試劑產(chǎn)品

內(nèi)毒素檢測

RhinoBio提供內(nèi)毒素檢測試劑:重組C因子內(nèi)毒素檢測試劑盒及其他相關(guān)試劑和耗材等。

糖苷酶系列

RhinoBio提供用于N-糖基化分析的 PNGase F、Quick? PNGase F-Plus和 EndoS等，用于0-糖基化分析用酶如:

0-Glycosidase 和a2-3,6,8,9 Neuraminidase 等，用于巖藻糖化的α1-2 Fucosidase等，以及三款組合裝。

蛋白酶系列

RhinoBio提供適用于特異性lgG的蛋白酶:IdeS protease、lgdE protease 和FabCOUPER protease;用于膚圖及

蛋白序列分析的重組糜蛋白酶、胰蛋白酶、GIu-C 和 LyS-C，可用于 0-糖基化和 O-糖位點測定的兩款O-糖蛋白酶;以及

其他不同功能的蛋白酶如: GyCOUPER protease 等 。

報告基因檢查測

RhinoBio 提供報告基因檢測細胞株: ADCC Reporter Bioassay, Core Kit 和 PD-1/PD-L1 BlockadeBioassay 等;

以及適用于報告基因檢測系統(tǒng)的螢火蟲熒光素酶試劑: Bio-GloryTM One-Step 螢火蟲熒光素酶分析試劑盒和

Bio-OneTM One-Step 螢火蟲熒光素酶分析試劑盒等。

細胞活力檢測

RhinoBio提供細胞活力檢測試劑:Cell Titer Turbo 2.0 Luminescent Cell ViabilityAssay 和 Cel TiterTurbo 3D

Luminescent Cell Viability Assay;細胞活性檢測染料:Resazurin細胞活性檢測染料和CCK-8 細胞活性檢測染料。

激酶活性檢測

RhinoBio提供用于定量來檢測激酶活性的 Kinase-TurboTM 激酶活性檢測試劑盒。

殘留檢測

RhinoBio殘留檢測系列主要包括核酸酶殘留檢測-NucleCutTM 核酸酶殘留ELISA 檢測試劑盒和宿主細胞蛋白殘留檢測

一CHO宿主細胞蛋白檢測試劑盒。

支原體檢測

RhinoBio提供兩款用于支原體測的試劑盒:MycoAlarm“ 支原體檢測試劑盒和 Myco-VisalmTM 一步法快速支原體檢

測試劑盒。

組織解離酶

RhinoBio提供一系列組織解離酶：胰蛋白酶、重組人透明質(zhì)酸酶、重組膠原酶 G、重組膠原酶 H和嗜熱菌蛋白酶，以及組織

解離試劑盒：大鼠肝臟細胞分離試劑盒、小鼠胰島細胞分離試劑盒和軟骨細胞分離試劑盒等。

重組抗原&Fc受體蛋白

RhinoBio提供重組表達高純度的抗體藥物靶標抗原。適用于抗體藥物的功能學分析、質(zhì)控放行指標中的相對結(jié)合活性分析

以及抗體藥物臨床前和臨床階段的藥代分析等。

01 02

T

Rhinogen?

臨床輸液反應(yīng)以熱原反應(yīng)危害最大，發(fā)生率最高。內(nèi)毒素（即革蘭氏陰性菌細

胞壁的脂多糖分子，lipopolysaccharide，LPS）是研究最透徹也是最常見的

生物熱原，注射即使是pg級別的痕量LPS也會導致病人嚴重的熱原反應(yīng)，引起

人體發(fā)熱、休克甚至死亡。內(nèi)毒素普遍存在且不易滅活，對制藥和醫(yī)療器械行

業(yè)是一個挑戰(zhàn)。因此，靈敏可靠的內(nèi)毒素分析技術(shù)是非常必須的。

RhinoBio于2018年成功研發(fā)重組C因子內(nèi)毒素檢測試劑盒，通過基因重組的方

式表達C因子，相比于傳統(tǒng)鱟試劑，可以從根本上排除G因子旁路干擾、批間差

異更易控制，且符合鱟資源保護需求并能解決醫(yī)藥行業(yè)日益增長的內(nèi)毒素檢測

需求和有限鱟資源之間的矛盾。

內(nèi)毒素檢測 內(nèi)毒素檢測

Endotoxin Detection

重組C因子

內(nèi)毒素檢測試劑盒

鱟C因子是鱟血細胞中一種對細菌內(nèi)毒素敏感的

絲氨酸蛋白酶原，在細菌內(nèi)毒素介導的鱟血凝集

系統(tǒng)反應(yīng)中，鱟C因子第一個被內(nèi)毒素激活而啟

動整個鱟血細胞中的血凝級聯(lián)反應(yīng)。

Rhinogen? 重組C因子是以基因重組的方式表達

的東方鱟（Tachypleus tridentatus）C因子重

組蛋白（Recombinant Factor C, rFC）。通過

結(jié)合內(nèi)毒素被激活的重組C因子能夠切割底物獲

得游離的熒光基團，熒光基團的釋放與內(nèi)毒素的

濃度呈正比，從而使得內(nèi)毒素被定量檢測。

本試劑盒可替代傳統(tǒng)鱟試劑用于人用和動物用注

射藥物（如化學藥品、放射性藥物、抗生素類、

生物制品等）及醫(yī)療器械（如透析液、植入式器

械等）的原輔材料、中間產(chǎn)品、放行產(chǎn)品的內(nèi)毒

素檢測。

產(chǎn)品列表

LRW CSE

漩渦震蕩

≥15min

1 溶解內(nèi)毒素工作標準品

5.0EU/ml 0.5EU/ml 0.05EU/ml 0.005EU/ml

2 制備梯度內(nèi)毒素標準品溶液

3 加入樣品

底物 緩沖液 酶溶液

4 配制底物試劑

5 加入底物試劑

6 熒光讀數(shù)

一步反應(yīng) 液體試劑 通量高 用時短

無熱原水

rFC酶

熒光底物

反應(yīng)緩沖液

內(nèi)毒素工作標準品

96孔白板

貨號 RAF-01 RAF-02

03 04

T

產(chǎn)品特點

Rhinogen? 重組C因子內(nèi)毒素檢測試劑盒是一種不依賴于動物源性成分，靈敏度高、特異性高、可穩(wěn)定且持

續(xù)提供的替代鱟試劑的內(nèi)毒素測定試劑，具有如下特性：

圖A1：葡聚糖存在時，LAL顯色法會受到G因子旁路的干擾，而

rFC法不受干擾。

液體試劑易于使用；

內(nèi)毒素特異性，無G因子旁路干擾；

不依賴動物源性成分，提供更高的供應(yīng)安全性。

終點熒光測定，與其他定量LAL方法相當。

圖A2：重組C因子內(nèi)毒素檢測法具有更高的檢測準確性。

圖A3：不同批次產(chǎn)品的標準曲線表明本產(chǎn)品具有優(yōu)異的重現(xiàn)性。

圖A4：重組C因子內(nèi)毒素檢測法靈敏度高檢測范圍為0.005EU-

/ml-5EU/ml。

消除了對動物源試劑的依賴，符合3R的替代原則；

重組表達生產(chǎn)，產(chǎn)品批間一致性良好。

靈敏度范圍從0.005到5EU/ml。

方法對比

Rhinogen? 重組C因子內(nèi)毒素檢測正在引領(lǐng)內(nèi)毒素檢測的發(fā)展。

表1. 重組C因子內(nèi)毒素檢測與傳統(tǒng)鱟試劑檢測法的對比：

傳統(tǒng)鱟試劑

對比內(nèi)容 顯色法 重組C因子內(nèi)毒素檢測法

凝膠法

終點濁度法 動態(tài)濁度法 基質(zhì)顯色法 動態(tài)顯色法

濁度法

性質(zhì)

需要儀器設(shè)備

檢測結(jié)果

檢測靈敏度

試劑來源

反應(yīng)原理

定量 定量 定量 定量 定量

級聯(lián)反應(yīng)（三種絲氨酸蛋白酶原參與，存在G因子旁路干擾） 單C因子反應(yīng)，準確性、精確性遠高于鱟試

劑法

鱟血變形細胞裂解物 重組表達鱟C因子，消除了對動物源試劑的

依賴，符合3R的替代原則

0.01 100EU/ml 0.1 1EU/ml 0.005 50EU/ml 0.005 5EU/ml

0.03、0.06、0.125

和0.25EU/ml

可自動化，能保存電子數(shù)據(jù) 人工讀數(shù)和記錄

（具有主觀性）

可進行熒光檢測（波長設(shè)置為380/440nm）

的酶標儀

定性，半定量

37℃水浴 酶標儀，濁度儀 溫控酶標儀 溫控酶標儀，

濁度儀

分光光度計，

酶標儀

重組C因子內(nèi)毒素檢測方法是傳統(tǒng)鱟試劑內(nèi)毒素檢測方法的進化，目前已被多家全球監(jiān)管機構(gòu)所接受，是未

來內(nèi)毒素檢測方法的發(fā)展方向。

2018年09月，F(xiàn)DA已批準rFC用于Eli Lilly的偏頭痛藥品Galcanezumab的最終產(chǎn)品的細菌內(nèi)毒素檢測及

產(chǎn)品放行；

2020年06月，2020版中國藥典《9251細菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導原則》提出，可使用重組C因子法進行

內(nèi)毒素檢查；

2021年01月01日，歐洲藥典EP 2.6.32 正式實施；

2023年初，USP提議通則<86>使用重組試劑進行細菌內(nèi)毒素測試，其征求意見期從2023年08月22日到

2024年01月31日。

與經(jīng)典的鱟試劑內(nèi)毒素檢測方法相比，重組C因子內(nèi)毒素檢測法是單C因子的酶促反應(yīng)，根本上消除了G因子旁

路干擾，具有更高的特異性，更好的專屬性、精密度、準確度、線性范圍及定量限。且由于單C因子是重組表

達，消除了對動物源試劑的依賴，符合3R原則，是目前鱟試劑內(nèi)毒素檢測方法的改良方法。

相關(guān)法規(guī)

05 06

T

儀器兼容性 相關(guān)配套試劑

無熱源耗材

廣泛適用性

通常來說，能用傳統(tǒng)鱟試劑進行內(nèi)毒素檢測的樣品，均能用重組C因子內(nèi)毒素檢測法進行檢測，傳統(tǒng)鱟試劑

不能檢測的樣品如含葡聚糖，也能用重組C因子內(nèi)毒素檢測法進行檢測。下述為Rhinogen? 重組C因子內(nèi)毒素

檢測試劑盒成功適用的部分案例。

除了不受葡聚糖引起的G因子旁路干擾，重組C因子內(nèi)毒素檢測與經(jīng)典的鱟試劑內(nèi)毒素檢測方法一樣都會受到

檢測基質(zhì)中高鹽、強酸強堿、血漿、天然熒光物質(zhì)等成分的干擾。由于檢測的干擾始終是產(chǎn)品特異性的，因

此每種產(chǎn)品均應(yīng)按照藥典要求進行正常的干擾驗證研究。

● 細胞發(fā)酵種子液

● 細胞培養(yǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基

● PBS緩沖液

培養(yǎng)基或緩沖液

● 氨基酸

● 康萊特

● 還原型谷胱甘肽

● 泮托拉唑

● 奧沙利鉑

● 環(huán)磷酰胺

注射劑

● 雙黃連注射液

中藥注射劑

● RSV疫苗/流感疫苗原液/制劑緩沖液

疫苗

● 長效人紅細胞生長刺激素收液上清及原液

● 重組人卵泡刺激素-CTP融合蛋白注射液

● 單抗樣品

● 重組蛋白酶等

蛋白樣品

● 改性淀粉止血材料

醫(yī)療器械

● NK細胞

● 病毒

細胞治療相關(guān)樣品

各不同來源水產(chǎn)品養(yǎng)殖用水

注射用水

Rhinogen?重組C因子內(nèi)毒素檢測試劑盒與多個廠家的

多款熒光酶標儀兼容，常規(guī)帶熒光模塊，能將激發(fā)/

發(fā)射波長設(shè)置為380/440nm的酶標儀均能用于此試劑

的使用。下述幾個品牌的多個型號的酶標儀均已通過

Rhinogen?重組C因子內(nèi)毒素檢測試劑盒進行的驗證。

如果未列出您的酶標儀，請聯(lián)系我們的技術(shù)支持團

隊，以了解兼容性。

Molecular Devices XPS

Molecular Devices

SpectraMax iD3

Molecular Devices

SpectraMax i3/i3x

Molecular Devices

M2e/M3/M4/M5/M5e

細菌內(nèi)毒素

工作標準品 RAF-01A-20

Rhinogen? 細菌內(nèi)毒素工作標準品系自大腸桿菌（ ）提取精制得

到的內(nèi)毒素，其效價以細菌內(nèi)毒素國家標準品標定。適用于內(nèi)毒素檢測過

程中各種陽性對照，和定量檢測時標準曲線的制備等。

注意事項：本品不得用于人體；稀釋后的內(nèi)毒素標準品溶液在2-8℃能穩(wěn)

定8小時，8小時后請棄用。

產(chǎn)品名稱 貨號 產(chǎn)品信息

50-100EU/瓶

20瓶/盒

無熱原水 RAF-01-06 Rhinogen? 無熱原水內(nèi)毒素含量＜0.005EU/ml，適用于各種內(nèi)毒素檢測

試驗，可用于內(nèi)毒素工作標準品和檢測樣品的稀釋。

30ml/瓶

6瓶/盒

規(guī)格

●

●

●

10mM氯化鎂

溶液 RAF-01G-06

Rhinogen? 10mM氯化鎂溶液是一種細菌內(nèi)毒素檢測輔助劑，當嘗試克服/

抑制螯合作用時，可用于調(diào)節(jié)檢測樣品中二價陽離子的濃度。

注意事項：本品內(nèi)毒素含量＜0.005EU/ml。

30ml/瓶

6瓶/盒

●

●

●

Tris緩沖液 RAF-01A-06

Rhinogen? Tris緩沖液（50mM Tris-HCl溶液，pH= 8.0）是一種細菌內(nèi)

毒素檢測輔助劑，可替代水用于高酸性或高堿性樣品的稀釋，使樣品的

pH控制在適合內(nèi)毒素檢測的范圍（pH 6-8）內(nèi)。

注意事項：本品內(nèi)毒素含量＜0.005EU/ml。

30ml/瓶

6瓶/盒

●

96孔平底微孔板

（白底透明蓋） RA-HC01

材質(zhì)：PS（聚苯乙烯）；

工作容積范圍：50 至 250 μl/孔；

1）可用于化學發(fā)光檢測，如螢火蟲熒光素酶報告基因檢測；2）

結(jié)合Rhinogen ? 重組C因子內(nèi)毒素檢測試劑盒（貨號：

RAF-01/RAF-02），用于內(nèi)毒素的高通量檢測；3）其它基于細胞

進行的檢測等。

96孔平底微孔板 50pcs/箱

（白底透明蓋） RA-HC01 50pcs/箱

產(chǎn)品名稱 貨號 規(guī)格 產(chǎn)品信息

96孔平底可拆卸微孔板

（白底透明蓋） RA-HC02

材質(zhì)：PS（聚苯乙烯）；

工作容積范圍：50 至 250 μl/孔；

結(jié)合Rhinogen ? 重組C因子內(nèi)毒素檢測試劑盒（貨號：

RAF-01/RAF-02），用于內(nèi)毒素的高通量檢測。

50pcs/箱

96孔平底可拆卸微孔板

（白底透明蓋） RA-HC02

材質(zhì)：PS（聚苯乙烯）；

工作容積范圍：50 至 250 μl/孔；

結(jié)合Rhinogen ? 重組C因子內(nèi)毒素檢測試劑盒（貨號：

RAF-01/RAF-02），用于內(nèi)毒素的高通量檢測。

50pcs/箱

材質(zhì)：PS（聚苯乙烯）；

工作容積范圍：50 至 250 μl/孔；

1）可用于化學發(fā)光檢測，如螢火蟲熒光素酶報告基因檢測；2）結(jié)合

Rhinogen? 重組C因子內(nèi)毒素檢測試劑盒（貨號：RAF-01/RAF-02），

用于內(nèi)毒素的高通量檢測；3）其它基于細胞進行的檢測等。

●

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O-glycans N-glycans

β(1,3)

β(1,3)

β(1,6) β(1,4)

β(1,4) β(1,4)

β(1,4) β(1,4)α(2,3) α(2,8)α(2,3) α(2,3)

α(1,6) α(1,3)

α(1,6) α(1,3)

α(2,6)

S/T

S/T N

N

PNGase F

（肽N-糖苷酶F）

15,000U

30μl

5×15,000U

30μl

產(chǎn)品名稱 規(guī)格

N-糖基化分析

選購指南

PNGase F是一款重組生產(chǎn)的糖苷內(nèi)切酶，可以在 N-連糖肽或糖蛋

白的高甘露糖、雜合和復(fù)雜寡糖部分最內(nèi)側(cè)的N-乙酰葡萄糖胺

（GlcNAc）和天冬酰氨殘基（Asn）之間進行切割，并釋放出完整

的寡糖鏈；

能完整地將絕大多數(shù)N-糖鏈釋放下來（除含α-1,3連接的核心巖藻

糖，常見于植物及昆蟲糖蛋白）。

●

●

Quick? PNGase F-Plus

（快切肽 N-糖苷酶 F）

30T

5×30T

可以在數(shù)分鐘內(nèi)完成抗體和融合蛋白的完全快速去糖基化，并與下

游 HPLC 或 MS 兼容;

既保留了 PNGase F 的特性，同時又能將所有 N-聚糖快速無偏好

釋放，且在非還原條件下酶切時還能同時保留抗體的二硫鍵，獲得

完整的去糖基化多聚體蛋白 (抗體)。

●

●

Immobilized

PNGase F，

Microspin

（固定化肽N-糖苷酶F）

1支

5支

10支

Immobilized PNGase F，Microspin是由PNGase F和瓊脂糖珠共價

偶聯(lián)的結(jié)合；

通過離心很容易將產(chǎn)物和PNGase F分離，簡化了后續(xù)的提純工藝。

●

●

Endo F1

（糖苷內(nèi)切酶F1）

0.33U/20μl

1U/60μl

3.3U/200μl

Endo F1可在肽和蛋白質(zhì)中切割天冬酰胺連接的高甘露糖（低聚甘露

糖）和一些雜合寡糖，雜合結(jié)構(gòu)的核心巖藻糖基化會使Endo F1的酶

切速率降低超過50倍；

在天然或非變性的去糖基化條件下使用。

●

●

EndoS

endoglycosidase

（糖苷內(nèi)切酶EndoS）

1000U

5×15,000U

30μl

EndoS endoglycosidase是IgG特異性糖苷內(nèi)切酶，可以水解IgG

Fc端N-聚糖的兩個N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）中間的β-1,4糖苷

鍵，釋放糖鏈，從而在Asn殘基上留下含有或不含核心巖藻糖的

GlcNAc，對所有類型的N-糖鏈都能有效酶切；

只對天然和完全折疊的IgG具有活性，適用于人 IgG 各亞型，及小

鼠、大鼠、猴、山羊、綿羊、牛、馬的 IgG 抗體糖基。

●

●

Endo F3

（糖苷內(nèi)切酶F3） 240U

QPF-001-A

QPF-001-B

貨號

QPF-019-A

QPF-019-B

QPF-101-A

QPF-101-B

QPF-101-C

QPF-016-A

QPF-016-B

QPF-016-C

QPF-011-A

QPF-011-B

QPF-017

Endo F3 切割游離的或天冬酰胺連接的三觸角或 α-(1-6) 巖藻糖

基化的雙觸角寡糖（非巖藻糖基化的雙觸角聚糖也會被切割，但速

度會降低40倍），以及三氨糖基殼二糖核心結(jié)構(gòu)；

α1-3 巖藻糖基化會抑制Endo F3活性，且對寡甘露糖和雜合分子沒

有活性；

在寡糖的二乙酰殼二糖核心中的兩個N-乙酰氨基葡糖殘基之間裂

解，產(chǎn)生一個截短的糖分子，其中一個 N-乙酰氨基葡糖殘基留在天

冬酰胺上，而PNGase F可完整去除寡糖。

●

●

●

產(chǎn)品詳情

07 08

糖苷酶

Glycosidases

RhinoBio重組糖苷酶系列包括了用于N-糖基化分析的PNGase F、

Endo F1等；多種組合用于---糖基化分析的---Glycosidase、α

2-3,6,8,9 Neuraminidase等；適用于巖藻糖分析的幾款酶：α1-2 Fucosidase、α1-2,4,6 Fucosidase和α1-3,4 Fucosidase；以及三款組

合裝。

09 10

應(yīng)用案例

Rhinogen? PNGase F與某進口主流品牌的 PNGase F對比

用于西妥昔單抗的N-糖基化分析，二者具有相同的酶切效

果。酶切位點

T

堵頭，使用時

折斷并反轉(zhuǎn)

填料

頂蓋

撐板

圖A1. Rhinogen? Immobilized PNGase F，Microspin試劑盒。

本產(chǎn)品以瓊脂糖基架，提供了預(yù)填充固定化的PNGase F的柱子，

可在柱內(nèi)直接酶切，酶切產(chǎn)物可用離心的方法收集。

圖A2. 對天然糖蛋白去糖基化時，通過等量糖蛋白變性后作為對

照，以確定非變性條件下去糖基化反應(yīng)程度。

200μg?糖蛋白

50μl?Rhinogen? ImmImmobilized?PNGase

F

200μg 糖蛋白

50μl Rhinogen? lmmobilized?PNGase?F

37°C，650rpm，16h

37°C，650rpm，1h

產(chǎn)品對比

Quick? PNGase F-Plus相

對進口品牌同款產(chǎn)品，具有更

好的酶切效果，相同的處理后

進行電泳分析,我們的酶切的更

徹底。

進口品牌

Rhinogen?

未處理

116.0

66.2

45.0

35.0

25.0

18.4

14.4

M

kDa Marker

116.0

66.2

25.0

14.4

35.0

18.4

45.0

Rhinozyme

QPF-003

NEB

P0711S

KJ003

未處理

樣品

kDa Marker

116.0

66.2

25.0

14.4

35.0

18.4

45.0

Rhinozyme

QPF-003

NEB

P0711S

KJ003

未處理

樣品

kDa Marker

116.0

66.2

25.0

14.4

35.0

18.4

45.0

Rhinozyme

QPF-003

NEB

P0711S

KJ003

未處理

樣品

KDa 1 2 3

使用Rhinogen? 內(nèi)切糖苷酶 F3（Endo

F3）和進口品牌的同款產(chǎn)品的對比研究，

二者具有相近的酶切效果。

250

150

100

70

50

40

30

20

kDa M 1 2 3

進口品牌

Rhinogen?

未處理

Rhinogen?

相同條件下使用Rhinogen? 內(nèi)切糖苷酶 F3

（Endo F3）和進口品牌同款產(chǎn)品對比用于

核糖核酸酶 B的分析，Rhinogen? 內(nèi)切糖

苷酶 F3（Endo F3）實際酶切效果優(yōu)于進口

品牌。

Rhinogen?

11 12

T

O-糖基化分析

α2-3,6,8,9

Neuraminidase

（α2-3,6,8,9唾液酸酶）

QPF-005-A

QPF-005-B

0.6U/30μl

5×0.6U/30μl

α2-3,6,8,9 Neuraminidase是一款重組糖苷外切酶，能夠釋放

糖鏈末端α(2,3)-, α(2,6)-,α(2,8)-,α(2,9)-唾液酸殘基；

不同唾液酸殘基的釋放速率大致為α(2,6)-＞α(2,3)- ＞α

(2,8)-＞α(2,9)-，通過加入足夠的酶，釋放的速率差異并不影

響它在實際應(yīng)用中的完全非特異性去除唾液酸殘基的性質(zhì)。

●

●

β1-4 Galactosidase

（β1-4半乳糖苷酶）

QPF-006-A

QPF-006-B

0.06U/30μl

5×0.06U/30μl

β1-4 Galactosidase是一款高度特異性的糖苷外切酶，能夠催化

寡糖或者糖蛋白非還原末端的β1-4連接的半乳糖殘基的水解；

該特異性僅在酶濃度<100mU/ml時才是明顯的。在較高酶濃度存在

時，會發(fā)生β1-3連接的半乳糖的水解。

●

●

β-NAcetylhexosaminidase

（β-N-乙?；被禾敲福?/p>

QPF-007-A

QPF-007-B

1.5U/30μl

5×1.5U/30μl

β-N-Acetylhexosaminidase是一款穩(wěn)定性較高的糖苷外切酶，

能夠催化釋放寡糖非還原末端β(1-3,4,6)-連接的N-乙酰葡糖胺

(GlcNAc）和β(1-4)-連接的N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)殘基。

●

α-NAcetylgalactosaminidas

（α-N-乙酰半乳糖苷酶）

QPF-018-A 2000U

α-N-Acetylgalactosaminidas是一款糖苷外切酶，可有效水解

與糖蛋白中絲氨酸或蘇氨酸殘基連接的α-N-乙酰半乳糖胺

（GalNAc）（Tn抗原）。

●

-Glycosidase

（ -糖苷酶）

QPF-004-A

-Glycosidase是一款重組糖苷內(nèi)切酶；能夠?qū)⑻堑鞍字蠸er或

Thr殘基的羥基連接的Core 1（Gal-β(1-3)-GalNAc-）及Core 3

（GlcNAc-β(1-3)-GalNAc-） -連雙糖釋放下來；

核心結(jié)構(gòu)的任何修飾都可以阻斷 -Glycosidase 的作用，核心結(jié)

構(gòu)以外的單糖必須通過一系列外切糖苷酶依次切割，直到僅保留

Core 1或Core 3二糖核心。

QPF-004-B

1,200,000U/30μl

5×1,200,000U/

30μl

產(chǎn)品名稱 貨號 規(guī)格 產(chǎn)品信息

●

●

酶切位點

一、Rhinogen? α2-3,6,8,9 Neuraminidase與某進口主流品牌同款產(chǎn)品對比用于抗體融

合蛋白樣品的去唾液酸研究。

結(jié)果顯示，二者同款產(chǎn)品在相同用量下釋放唾液酸殘基后獲得的各組峰面積相同，將Rhinogen?產(chǎn)品用量減半也可獲得相同的酶切效果。

唾液酸酶來源

反應(yīng)體系

Group4

Group5

序號 酶切條件1 酶切條件2 酶切條件3 酶切條件4

Group6

Group7

Rhinogen? Rhinogen? Rhinogen?

0.625U/mg

5.4

29.8

25.9

39.0

1.25U/mg

4.8

28.9

24.3

42.0

1.6U/mg

5.5

29.3

25.36

40.0

某主流品牌P

1.25U/mg

4.9

30.3

25.2

39.6

應(yīng)用案例

13 14

T

酶切位點

二、客戶使用本公司α2-3,6,8,9 Neuraminidase與進口產(chǎn)品進行對比檢測，表明兩種酶使用

效果一致。

峰1% 峰2% 峰3% 峰4%

18.18 22.08 28.67 31.06

RT/min ＜25.4

02

序號

26.7 28.7 ＞30.7

DAMAS

品牌

01 18.07 21.32 28.72 31.89 安捷倫

應(yīng)用案例

三、β-N-Acetylhexosaminidase比進

口品牌的同款產(chǎn)品的酶活也要高很多，

相同的酶使用量及在相同的反應(yīng)條件

下，反應(yīng)25min后，我們400nm波長條

件下的OD值為0.799，而進口品牌的只

有0.305。（相同的酶使用量，相同的酶

切體系及條件下，我們的實際使用效果

更好。）另外，從這個電泳圖上可以看

出，β-N-Acetylhexosaminidase產(chǎn)品

的純度更高，而進口品牌產(chǎn)品中有相當

多雜條帶，因此我們產(chǎn)品的純度更高。

蛋白濃度

（μg/ml）

OD400

100

0.799

約200

0.305

0

0.007

樣品名稱 RhinogenTM 進口品牌 陰性對照

巖藻糖分析

α1-2 Fucosidase

（α1-2巖藻糖苷酶） QPF-013-A α1-2 Fucosidase可催化水解糖蛋白或游離寡糖上α1-2 連接的

巖藻糖。

● 1000U

產(chǎn)品名稱 貨號 規(guī)格 產(chǎn)品信息

α1-2,4,6 Fucosidase

（α1-2,4,6 巖藻糖苷酶） QPF-014-A 100U

α1-2,4,6 Fucosidase可催化寡糖中α1-2、α1-4和α1-6末端

巖藻糖殘基的水解；

與其他鍵相比，可以更有效地切割α1-6巖藻糖殘基。

●

α1-3,4 Fucosidase

（α1-3,4 巖藻糖苷酶） QPF-015-A 50μl

α1-3,4 Fucosidase可有效識別 α1-3,4 巖藻糖基化聚糖（例如

Lewis X/A 表位，包括它們的唾液酸化對應(yīng)物）并水解這些底物

中的末端 α1-3和 α1-4巖藻糖基鍵，而無需去除唾液酸部分；

●

15 16

T

酶切位點

Protein Deglycosylation

Kit Ⅰ

(for -linked Glycans)

QPF-008

用于唾液酸化的 -糖鏈的酶

切釋放。 1kit

產(chǎn)品名稱 貨號 規(guī)格 組成 產(chǎn)品信息

-Glycosidase

α2-3,6,8,9 Neuraminidase

●

●

Protein Deglycosylation

Kit Ⅱ

(for N-Linked & Simple

-Linked Glycans)

QPF-009

PNGase　F（Glycerol-free）

-Glycosidase

α2-3,6,8,9 Neuraminidase

用于唾液酸化的糖蛋白的N糖鏈及 -糖鏈的酶切釋放。 1kit

●

●

●

Protein Deglycosylation

Kit Ⅲ

(for N-linked & Complex

-linked Glycans)

QPF-010 用于常見的所有N-糖鏈及部

分復(fù)雜 -糖鏈的酶切釋放。 1kit

PNGase　F（Glycerol-free）

-Glycosidase

α2-3,6,8,9 Neuraminidase

β1-4 Galactosidase

β-N-acetylhexosaminidase

●

●

●

●

●

注意：（１）以上三款組合裝均為單只組合，可靈活使用； （２）所有酶及試劑均與下游HPLC及MS兼容。

糖苷酶組合裝

有文獻報道，PNGase F在37℃下條件下，在2.5M尿素溶液中可以穩(wěn)定24h，在5M尿素溶液中可以保留40％的活性。因此反應(yīng)

體系中存在較低濃度的尿素可能不影響Rhinogen? PNGase F(Glycerol-free)去糖基化的活性。

Q1：PNGase F（貨號：QPF-001）在含有尿素的反應(yīng)體系中是否可以正常使用?

離子及非離子型表面活性劑在0.5-1.0%濃度范圍時，大多數(shù)糖苷酶都不受或受到較小影響。但PNGase F、O-Glycosidase及

β1-4 Galactosidase這3種酶會受SDS的抑制，必須加入1%終濃度的NP-40到反應(yīng)混合物中才能解除抑制。

Q2：表面活性劑是否會抑制外切糖苷酶/糖苷內(nèi)切酶活性？

Rhinogen? Protein Deglycosylation Kit I&Ⅱ&Ⅲ 所有的酶及其儲存緩沖液均與下游HPLC及MS應(yīng)用兼容。由于糖蛋白變

性緩沖液（含SDS）與質(zhì)譜不能兼容，且難以從反應(yīng)體系中除去，因此如果使用質(zhì)譜進行寡糖鏈或蛋白分析，建議在非變性條

件下進行去糖基化反應(yīng)?；蚴褂闷渌淖冃詶l件（如尿素、鹽酸胍等），酶切后可以采用微透析或微量過濾制備MS分析的樣

品。

Q6：Rhinogen?三款試劑盒（貨號：QPF-008、QPF-009、QPF-010）與下游HPLC及MS兼容嗎？

在天然條件下，β1-4連接的半乳糖殘基可能難以從完整IgG中去除，且去除效率根據(jù)IgG的亞型而變化很大。 通常需要延長

孵育時間和增加酶的使用量。 建議根據(jù)特定的樣品進行適度優(yōu)化。

Q5：β1-4 Galactosidase（貨號：QPF-006）從完整IgG中去除β1-4連接的半乳糖殘基需要

的條件？

可以。PNGase F及O-Glycosidase采用相同的緩沖液及反應(yīng)條件，而α2-3,6,8,9 Neuraminidase具有非常寬pH適用范圍

（pH 4.5-8.5），在PNGase F及O-Glycosidase反應(yīng)體系中具有較好的活性，三者可以同時使用。

蛋白質(zhì)的糖基化修飾有N-糖基化及O-糖基化修飾，O-Glycosidase適用于釋放附著于Ser/Thr的Core 1和Core 3 O-連接的二

糖核心。如果底物中確定含有O-糖鏈，請確保同時使用Neuraminidase，以釋放末端的唾液酸修飾基團。同時由于空間位阻

效應(yīng)（蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)）可以阻礙內(nèi)切糖苷酶到達其底物作用位點，在去糖基化之前進行變性，同時按實驗操

作加入NP-40溶液有助于O-連聚糖有效的釋放。如果不想變性處理，則考慮添加更多的酶或延長孵育時間。

糖苷酶系列常見問題與解決方案

Q4：是否可以同時使用PNGase F（貨號：QPF-001）、 -Glycosidase（貨號：QPF-004）

及α2-3,6,8,9 Neuraminidase（貨號：QPF-005）？

Q3：使用 -Glycosidase（貨號：QPF-004）處理糖蛋白后沒有看到糖鏈的去除，可能是什

么原因？

17 18

T

蛋白酶 蛋白酶 Protease

Rhinogen?

位點區(qū)別 流程展示

IgG特異性蛋白酶

fi反應(yīng)時間ffffl

fi反應(yīng)時間ffifl

fi過夜

IdeS protease

QIP-001-A 5000U

QIP-001-B 5*5000U

QIP-001-C 1000U

產(chǎn)品名稱 貨號 規(guī)格

IdeS protease僅在鉸鏈區(qū)下方的一個特定位點裂解IgG 以產(chǎn)生F(ab')2

和Fc片段；

可適用的底物更廣，除可酶切人IgG1~4、猴、綿羊、兔IgG外，還對小

鼠IgG2a、IgG3具有特異性切割活性。

●

●

Immobilized IdeS，

Microspin

QIP-101-A 1支

QIP-101-B 5支

QIP-101-C 10支

Immobilized IdeS，Microspin是IdeS protease和瓊脂糖珠的共價偶聯(lián)；

消化完成后的溶液內(nèi)，可得到F(ab')2和Fc片段，而不含IdeS酶。

●

●

QIP-102-A 1支

QIP-102-B 5支

QIP-102-C 10支

Immobolized IdeS

Cut-Pure Kit，

Microspin

Immobolized IdeS Cut-Pure Kit，Microspin包含用于抗體消化的

Immobilized IdeS，Microspin和用于F(ab')2片段以及Fc片段分離的

Protein A純化柱。

●

IgdE protease QIP-007-C 1000U

IgdE protease僅在人IgG1鉸鏈區(qū)上方的一個特定位點裂解以產(chǎn)生Fab和

完整Fc片段；

能有效地切割人hIgG1，不能切割人其他IgG 亞型和其他物種的IgG。

●

FabCOUPER

protease QIP-009 1000U

FabCOUPER protease可在鉸鏈區(qū)上方單個位點特異性消化人IgG1，生成

完整的Fab和Fc片段；

如果去除 N-聚糖，則Fc上可能會出現(xiàn)第二個消化位點；

在天然條件下具有活性并且需要鈣離子的存在，但被Zn2+抑制，同時被

絲氨酸蛋白酶抑制劑及EDTA抑制；

該酶對具有突變鉸鏈區(qū)的抗體（例如 LALA 突變）具有活性。

●

●

●

產(chǎn)品詳情

圖1. Rhinogen? Immobolized IdeS，Microspin試劑盒操作簡介。本產(chǎn)品以瓊脂糖基架，

提供了預(yù)填充固定化的IdeS的柱子，可在柱內(nèi)

直接酶切，酶切產(chǎn)物可用離心的方法收集。

30min

60min

圖1. Rhinogen? Immobolized

IdeS Cut-Pure Kit，Microspin

試劑盒操作簡介。

本試劑盒中有兩個離心柱，可分

別用于酶切和純化F(ab')2和

Fc/2。

RhinoBio蛋白酶系列產(chǎn)品包括重組特異性IgG蛋白酶：IdeS protease、IgdE

protease和FabCOUPER protease；用于肽圖及蛋白序列分析的重組糜蛋白

酶、胰蛋白酶和Glu-C；可用于O-糖基化和O-糖位點測定的兩款O-糖蛋白酶；

以及其他蛋白酶如：GlyCOUPER protease等。

19 20

T

注意：1）對于不同的蛋白樣品，需要實驗摸索最適的酶濃度及反應(yīng)時間； 2）本產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人或動的物診斷及治療用途。

Chymotrypsin(Sequencing Grade)

（重組糜蛋白酶）

產(chǎn)品名稱 貨號 規(guī)格 最適pH范圍

1：50

QIP-002-A

QIP-002-A

25μg

4×25μg

利用重組畢赤酵母系統(tǒng)重組表達

（25kDa） pH7.0-9.0

來源(分子量大小) 酶切位點 最適pH范圍 其他信息

產(chǎn)品選購指南

最適溫度是30℃，超過37℃酶會自切。

選擇性水解芳香族氨基酸如：酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸的羧基端

形成的肽鍵；

也可以較慢的速率緩慢水解由亮氨酸和蛋氨酸形成的肽鍵；

還可作用于敏感氨基酸形成的酯。

Endoproteinase Lys-C

（重組賴氨酰蛋白酶） 1：20到1：1000

QIP-004-A

QIP-004-B

15μg

5×15μg

利用重組大腸桿菌系統(tǒng)重組表達

（31±3.1kDa） pH7.0-9.5

酶切溫度應(yīng)避免超過 37℃，以防發(fā)生酶的自降解；

酶切體系中應(yīng)避免 TLCK、鹽酸胍等酶抑制劑；

在反應(yīng)體系中含 0.2%SDS、1.0%Triton、6mol/L 尿

素、0.5mol/L NaCl、20%乙腈時，Lys-C 具有酶活。

特異性針對賴氨酰肽鍵酶切，包括含 DK、PK 序列的完全特異酶切。

Trypsin (Sequencing Grade)

（重組胰蛋白酶） 1：20到1：100

QIP-003-A

QIP-003-B

20μg

5×20μg

利用重組大腸桿菌系統(tǒng)重組表達

（25kDa） pH7.0-8.0

最適溫度是37℃，穩(wěn)定不自切；

至少孵育1h。 特異性切割多肽鏈中精氨酸和賴氨酸殘基中的羧基形成的肽鍵。

Glu-C (Sequencing Grade)

（重組谷氨酸蛋白酶） 1：20到1：100

QIP-005-A

QIP-005-B

10μg

5×10μg

利用重組大腸桿菌系統(tǒng)重組表達

（24kDa） pH8.0-8.5 特異性切割多肽鏈中谷氨酸或天冬氨酸殘基羧基端肽鍵。 在溫度為25℃或37℃條件下酶切 。

Quick? Trypsin

（Sequencing Grade） QIP-012-A 20μg 利用重組大腸桿菌系統(tǒng)重組表達

（25kDa） pH7.0-8.0 特異性切割多肽鏈中精氨酸和賴氨酸殘基中的羧基形成的肽鍵。 1：20到1：100 最適溫度是37℃，穩(wěn)定不自切；

最短孵育時間為10min。

●

●

●

●

●

●

●

●

●

用于肽圖及蛋白序列分析的蛋白酶

從下圖中可以看出使用本公司Trypsin酶與進口品牌同類型產(chǎn)品同時進行肽圖分析，肽圖圖譜基本一致，表

明兩種酶酶切效率沒有明顯差異。

酶切位點 應(yīng)用案例

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舊在，幾度夕陽紅。

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T

O-糖位點分析

O-糖蛋白酶是一組種類不斷增加的高度特異性的內(nèi)切蛋白酶，可識別并切割糖肽/糖蛋白上，與O-糖基化絲

氨酸或蘇氨酸相鄰的位置。對O-糖蛋白酶酶切產(chǎn)生的糖肽進行MS分析，可提供有關(guān)蛋白序列中O-糖基化位點

和每個糖基化位點上連接的O-糖鏈結(jié)構(gòu)的重要信息。

Rhinogen? O-Glycoprotease對唾液酸化的核心1 O-聚糖活性最高，對核心3 O-糖基化和α-2,3唾液酸化核

心1的糖蛋白活性較差，與Tn抗原、核心2以及α-2,6唾液酸化核心1的 -聚糖位點無活性。僅僅只有N-聚糖

修飾時，此酶不酶切。該酶對帶有或不帶有唾液酸的O-聚糖蛋白均有活性，在去唾液酸的 -聚糖蛋白上活性

更高。此酶在pH 5.5-7.5之間均能保持較高活性，能耐1M NaCl，但對EDTA高度敏感（0.5mM EDTA），并且

被Zn2+部分抑制。

O-GlyCORTAR protease

-Glycoprotease

圖1. Rhinogen? -Glycoprotease酶切位點圖

圖2. Rhinogen? O-GlyCORTAR protease酶切位點圖

產(chǎn)品名稱 O-Glycoprotease O-GlyCORTAR protease

貨號 QIP-008 QIP-013

規(guī)格 2000U 2000U

來源 Akkermansia muciniphila Pseudomonas aeruginosa

分子量 42kDa 97kDa

酶活特性 更高的O-聚糖位點覆蓋率，但需要去除唾液酸以提

高酶活性。

對不同的O-聚糖結(jié)構(gòu)表現(xiàn)出更廣泛的活性，包括唾

液酸化底物，然而對具有兩個相鄰O-糖基化

Ser/Thr殘基位點的活性有限。

總結(jié)

如需了解糖蛋白底物中O-聚糖位點的完整信息（包含多個具有兩個相鄰O-糖基化Ser/Thr殘基的位點），

O-Glycoprotease更加適用；而想要保留糖蛋白底物唾液酸化的信息，推薦使用O-GlyCOUPE protease。

O-GlyCOUPER protease和O-Glycoprotease兩款產(chǎn)品可互補提供有關(guān)聚糖組成和O-聚糖位點的完整信息。

可覆蓋O-聚糖

結(jié)構(gòu)

多種O-聚糖結(jié)構(gòu)，包括唾液酸化的核心1和核心3，

但酶切程度降低。

多種O-聚糖結(jié)構(gòu)，包括唾液酸化的核心1和核心2及

Tn抗原。

兩款O-糖蛋白酶特點對比

Rhinogen? -GlyCORTAR protease是一種 -聚糖依賴性蛋白酶，可消化攜帶粘蛋白型 -聚糖的蛋白質(zhì)，包

括唾液酸化底物、糖基化Ser和Thr殘基的N末端。該酶不會消化未修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基，也不會消化

糖蛋白的 N-糖基化位點；并且可接受多種 -聚糖結(jié)構(gòu)，包括唾液酸化的糖基化核心1和核心2結(jié)構(gòu)以及Tn抗

原。此酶在pH7.6時活性最高，對EDTA敏感，在＞1mM EDTA條件下，會被完全抑制。

Carboxypeptidase B

羧肽酶B又稱為肽酰-L-賴氨酸（L-精氨酸）水解酶，屬于金屬羧肽酶A和羧肽酶B(CPA/CPB)家族，每分子含

有一個Zn原子，可選擇性水解蛋白或多肽羧基端的精氨酸和賴氨酸。活性受精氨酸、賴氨酸的競爭性抑制，

金屬離子螯合劑如EDTA等抑制酶活。

Rhinogen? Carboxypeptidase B與大鼠胰腺羧肽酶B氨基酸序列完全一致，經(jīng)過大腸桿菌系統(tǒng)重組表達生產(chǎn)

并經(jīng)過層析純化得到的重組羧肽酶B。分子量為33.8kD，等電點為6.0，最適pH為7.5~9.0。在25℃~37℃范

圍下具有較好的酶切活性，在低溫下適當延長反應(yīng)時間也可以進行消化。

其他蛋白酶

23 24

T

蛋白酶系列常見問題與解決方案

酶切位點 產(chǎn)品列表

GlyCOUPER protease

柔性鏈接（Flexible linker）在融合蛋白中起著重要的作用。融合蛋白是由不同蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域（functional domain）通過柔性鏈接區(qū)域連接在一起的蛋白質(zhì)。柔性鏈接區(qū)域通常包含了一段較長、高度可變的氨基

酸序列。柔性鏈接在融合蛋白中起到橋梁和調(diào)節(jié)作用，使不同結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)能夠協(xié)同工作，并具備更多功

能多樣性和適應(yīng)性。作為融合蛋白重組不可或缺的組成部分，Linke在構(gòu)建穩(wěn)定、具有生物活性的融合蛋白

中發(fā)揮著重要的作用。在重組蛋白藥物的設(shè)計和開發(fā)中，柔性鏈接區(qū)域的選擇和優(yōu)化是一個重要的策略，可

以幫助實現(xiàn)藥物的最佳效果。通過合理設(shè)計柔性鏈接區(qū)域，可以改善重組蛋白藥物的效力、穩(wěn)定性和藥理特

性，為疾病治療提供更好的選擇。

Rhinogen? GlyCOUPER protease是一種獨特的酶，用于消化甘氨酸或甘氨酸和絲氨酸殘基重復(fù)序列組成的由

柔性連接體連接的融合蛋白。該酶在天然反應(yīng)條件下具有活性，可以分離多功能融合蛋白的各個結(jié)構(gòu)域，從

而促進對這些分子的表征和了解。能夠?qū)?fù)雜的融合蛋白進行中級表征，既能降低樣品的整體復(fù)雜性，又能

對特定結(jié)構(gòu)域進行鑒定，并對翻譯后修飾進行監(jiān)測。

酶切原理 產(chǎn)品列表

產(chǎn)品名稱 貨號

GlyCOUPER protease QIP-010-A 2000U

規(guī)格

Carboxypeptidase B

QIP-006-A

QIP-006-B

產(chǎn)品名稱 貨號

1mg

5*1mg

規(guī)格

可以，IdeS protease可以切割Fc融合蛋白。例如，Enbrel（依那西普）被IdeS protease有效地切割成Fc和TNFR。

Enbrel是由hIgG1的Fc結(jié)構(gòu)域和p75腫瘤壞死因子受體（TNFR）組成的融合蛋白。

Q1：Fc融合蛋白可以用IdeS protease（貨號：QIP-001）來進行消化嗎？

IdeS protease識別底物不僅與抗體鉸鏈區(qū)下方的序列有關(guān)，還與抗體CH2區(qū)域的結(jié)構(gòu)有關(guān)系。所以并不是序列相同，酶

活就一定一樣。

Q2：IdeS protease（貨號：QIP-001）對具有不同鉸鏈區(qū)結(jié)構(gòu)但是鉸鏈區(qū)序列相同的蛋白，

----酶活是是否一樣？

Q3：IdeS protease（貨號：QIP-001）對于不同變性劑的耐受程度如何，比如尿素、鹽

酸胍、乙腈等？

可以，對于人IgG1分子，兩種酶可以組合使用以產(chǎn)生特定的鉸鏈肽。IgdE的孵育時間明顯更長，建議首先加入IgdE消化底

物，然后在最后30分鐘內(nèi)添加IdeS。

Q6：IgdE（貨號：QIP-007）和IdeS（QIP-001）能用于相同的反應(yīng)嗎？

Q7：O-Glycoprotease（貨號：QIP-008）對不同的底物是否有偏好？

若酶切體系含有8M尿素，按照37℃的反應(yīng)條件，會對Lys-C酶活造成60%左右的損失。因此當反應(yīng)體系中含有高濃度尿素時，

需考慮酶活損失的部分，增加酶的使用量。但由于酶對不同底物的酶切效果有差異，因此具體增量，需通過摸索試驗確認。

在天然條件下，β1-4連接的半乳糖殘基可能難以從完整IgG中去除，且去除效率

根據(jù)IgG的亞型而變化很大。 通常需要延長孵育時間和增加酶的使用量。 建議根

據(jù)特定的樣品進行適度優(yōu)化。

Q5：Glu-C (Sequencing Grade)（貨號:QIP-005）對于不

0000同變性劑的耐受程度如何？ 0 100

2M 94.73

5M 12.26

8M 0

0.1% 90.15

0.5% 78.63

1% 49.87

對照（不添加變性劑

尿素

SDS

變性劑 貨號 規(guī)格

蛋IdeS protease不能很好地耐受變性劑，建議不要在有變性劑體系下使用IdeS protease進行實驗。

Q4：Endoproteinase Lys-C（貨號：QIP-004）是否能耐受8M尿素？

O-糖蛋白酶對唾液酸化的核心1 O-聚糖活性最高，對核心3 O-糖基化和α 2,3唾液酸化核心1的糖蛋白活性較差，與Tn抗原、

核心2和α2,6唾液酸化核心1的 O-聚糖位點無活性。僅僅只有N-聚糖修飾時，此酶不酶切。該酶對帶有或不帶有唾液酸的 O聚糖蛋白均有活性，在去唾液酸的 O-聚糖蛋白上活性更高。

Q8：O-GlyCORTAR protease（貨號：QIP-013）是否在所有O-糖基化位點酶切？

對不同的O-聚糖結(jié)構(gòu)具有廣泛的活性；然而該酶對具有兩個相鄰--糖基化絲氨酸/蘇糖基殘基的位點的活性有限。有關(guān)糖蛋白

底物中含有多個位點和兩個相鄰O-糖基化絲氨酸/蘇基殘基的O-聚糖位點的完整信息，O-Glycoprotease（貨號：QIP-008）

可能是更好的選擇。

25 26

T

Rhinogen?

報告基因檢測 報告基因檢測 報告基因檢測細胞

報告基因檢測試劑

報告基因檢測

報告基因檢測是基因表達調(diào)節(jié)研究的重要手段，目前已被廣泛應(yīng)用于分子生物

學及細胞生物學研究領(lǐng)域。報告基因檢測法是一種將轉(zhuǎn)錄調(diào)控和報告基因（如

熒光素酶）偶聯(lián)表達，通過報告基因表達產(chǎn)物（如熒光素酶）活性的測定判斷

細胞刺激物（如小分子化合物、重組蛋白）生物學活性的方法，《中國藥典》

2015年版已將報告基因檢測方法列為干擾素活性測定法第二法（通則3523）。

目前在生物制品PD1/PD-L1、IL6/IL6R等相關(guān)單抗藥物的生物學活性檢測和Fc

效應(yīng)功能研究中，報告基因檢測法已經(jīng)起到了至關(guān)重要的作用。

RhinoBio提供報告基因檢測細胞株：ADCC Reporter Bioassay, Core Kit和

PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay等；以及適用于報告基因檢測系統(tǒng)的螢火蟲

熒光素酶試劑：Bio-GloryTM-One-Step螢火蟲熒光素酶分析試劑盒和

Bio-OneTM One-Step螢火蟲熒光素酶分析試劑盒等。

Reporter Bioassay Detectior

Bio-BrightTM One-Step 螢火蟲熒光素酶分析試劑盒 RA-GL07 50ml

產(chǎn)品名稱 貨號 規(guī)格

Bio-GloryTM One-Step 螢火蟲熒光素酶分析試劑盒

Bio-OneTM One-Step 螢火蟲熒光素酶分析試劑盒

Bio-SteadyTM One-Step 螢火蟲熒光素酶分析試劑盒 RA-GL06

RA-GL05 50ml

VEGF Reporter Bioassay

PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay

Rhinogen? FcγRs expressing HEK293T cells

TSHR Reporter Bioassay

GLP-1R Reporter Bioassay

ADCC Reporter Bioassay, Complete Kit (A431)

ADCC Reporter Bioassay, Complete Kit (BT474)

產(chǎn)品名稱 貨號 規(guī)格

ADCC Reporter Bioassay, Core Kit

ADCC Reporter Bioassay, Complete Kit (Raji)

ADCC Reporter Bioassay, Complete Kit (WIL2-S)

ADCC Reporter Bioassay

抗體依賴的細胞介導的細胞毒性作用（Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC）是免疫

系統(tǒng)對抗病毒感染及腫瘤疾病的一種重要免疫防御機制。抗體通過與靶細胞表面抗原特異性結(jié)合，招募如自

然殺傷（Natural killer, NK）細胞等效應(yīng)細胞殺死靶細胞。NK細胞表面表達FcγRIIIa蛋白受體，能識別

并結(jié)合抗體的Fc端，從而使NK細胞結(jié)合到靶細胞周圍。一旦Fc受體與抗體的Fc區(qū)域結(jié)合，NK細胞就會釋放細

胞因子和細胞毒性顆粒，進入靶細胞觸發(fā)細胞凋亡。

RA-GL04

50ml

50ml

27 28

T

Rhinogen? ADCC Reporter Bioassay是一種生物發(fā)光報告基因檢測方法，用于檢測抗體的ADCC生物學活

性。其作用機理基于NFAT（Nuclear factor of activated T-cells）反應(yīng)通路。本系統(tǒng)采用基因工程改造

的Jurkat細胞作為效應(yīng)細胞，該細胞穩(wěn)定表達FcγRIIIa受體（V158高親和力突變體）和由NFAT應(yīng)答元件驅(qū)

動表達的螢火蟲熒光素酶?？贵w通過與效應(yīng)細胞表面FcγRIIIa的結(jié)合，激發(fā)細胞內(nèi)NFAT反應(yīng)元件，NFAT反

應(yīng)元件則驅(qū)動螢火蟲熒光素酶的表達。熒光素酶活性通過生物發(fā)光進行定量。

傳統(tǒng)的ADCC檢測方法是利用外周血單核細胞（Peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）或者從其中

分離得到NK細胞作為效應(yīng)細胞進行檢測，該方法的效應(yīng)細胞較難獲取，且方法變異性大、操作繁瑣。相較于

傳統(tǒng)的ADCC檢測法，報告基因法具有操作簡單、靈敏、準確性高等優(yōu)點。目前報告基因檢測方法已被納入

2015版中國藥典通則3523，是單克隆抗體活性研究及質(zhì)量控制的重要手段，適用于重組單克隆抗體的功能學

研究，表達細胞篩選評價以及質(zhì)控放行標準方法建立。

傳統(tǒng)ADCC檢測法

PBMC 變異性大，不適合作為批放行檢測

方法

對糖修飾敏感度低；準確性和精密

度不如工程改造Jurkat

和PBMC法一樣，可導致細胞裂解，

以此評估抗體ADCC活性

確認抗體ADCC活性的金標準

96孔平底可拆卸微孔板

（白底透明蓋） 工程改造Jurkat

方法 效應(yīng)細胞 優(yōu)點 缺點

工程改造NK-92

報告基因法檢測，靈敏、準確性高、

精密度高，適合作為生產(chǎn)批簽發(fā)指標

（報告基因檢測方法已被納入2015

版中國藥典通則3523）

不能真實反映體內(nèi)的作用效果

表1. 傳統(tǒng)ADCC檢測與報告基因方法的對比：

簡單易操作 無固有變異性 用時短

立即檢測光信號

25μ l抗體

25μ l靶細胞

25μ l效應(yīng)細胞 +Light

熒光素酶檢測試劑（RA-GL04）

Bio

Glory

孵育6-24hr@37℃，5%CO2

冷卻96孔板≥15min@室溫

Target Cell Effector cell NFAT Luciferase

NFAT Pathway

Light

Antigen FcγRIIIa 檢測原理

操作流程

產(chǎn)品特點

Rhinogen? ADCC報告基因檢測系統(tǒng)提供的ADCC

生物學活性檢測方法具有操作簡便、變異性低、

靈敏度高等特點，可用于針對不同靶細胞的抗體

效應(yīng)功能檢測。

將尼妥珠單抗用PNGase F酶切，部分及完全去

除糖鏈后，ADCC活性發(fā)生變化，Rhino -

gen@ 0ADCC Reporter Bioassay系統(tǒng)可靈敏

檢測。

10 -4 10 -3 10 -2 10 -1 10 0 10 1 10 2

0

2

4

6

8

10

12 尼妥珠單抗(未酶切)

FI

尼妥珠單抗(含糖50%)

尼妥珠單抗(含糖0%)

Log[尼妥珠單抗] , μg/ml

靈敏度高：可靈敏的檢測到抗體糖型的改變。

ADCC效應(yīng)與抗體樣品的巖藻糖含量呈反比。不同表達系統(tǒng)獲得的尼妥珠單抗含巖藻糖結(jié)構(gòu)的比例不同。

Rhinogen? ADCC Reporter Bioassay可以靈敏辨別抗體之間的差異，適用于抗體ADCC活性篩選。

29 30

T

Rhinogen? ADCC效應(yīng)細胞株具有良好的代次穩(wěn)定性。我們以MDA-MB-175 VII為靶細胞，以Her2靶點抗體進行

了30代以上的穩(wěn)定性評估，第31代的細胞仍能穩(wěn)定用于ADCC活性檢測。這意味著細胞可以在體外傳代至少90

天，并且還能有效用于ADCC活性測定。

穩(wěn)定性好：傳代30次仍可穩(wěn)定靈敏檢測，數(shù)據(jù)重復(fù)性好。

ADCC增強型抗體 0.198 0.147

ADCC增強型抗體-V1 0.104 0.075

ADCC增強型抗體-V2 0.078 0.075

11代 31代

EC50

Sample

Log[HER2單 抗],μg/ml

第31代

10 -2 10 -1 10 0 10 1 10 2 10 3

0

2

4

6

8

10

12

14 ADCC增強型抗體

FI

ADCC增強型抗體-V1

ADCC增強型抗體-V2

Log[HER2單 抗],μg/ml

10 -2 10 -1 10 0 10 1 10 2 10 3

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18 ADCC增強型抗體

FI

ADCC增強型抗體-V1

ADCC增強型抗體-V2

第11代

Rhinogen? ADCC Reporter Bioassay 相關(guān)產(chǎn)品：

產(chǎn)品名稱 貨號 組成 規(guī)格 體積

ADCC Reporter Bioassay, Core Kit RA-CK01 ADCC Bioassay效應(yīng)細胞 5×106

cells/ml 1ml

G418 RA-AD02 \\ 1ml 1ml

Rhinogen?RPMI 1640 培養(yǎng)基，無酚紅 RA-BM11 \\ 500ml 500ml

Rhinogen? ADCC Bioassay細胞穩(wěn)定劑 RA-AD01 ADCC Bioassay效應(yīng)細胞 0.5ml 0.5ml

圖例：

圖例：

10 -3 10 -2 10 -1 10 0 10 1 10 2 10 -4

0

3

6

9

12

15 尼妥珠單抗(CHO)

FI

尼妥珠單抗(NSO)

Log[尼妥珠單抗], μg/ml

67.77% 87.88% 含巖藻糖型結(jié)構(gòu)

的比例

抗體 尼妥珠單抗(CHO) 尼妥珠單抗(NS0)

原理明確：基于抗體結(jié)合細胞對效應(yīng)細胞FcγRIIIa受體信號通路的激活；

操作簡便：檢測過程簡單，檢測試劑易用。

Rhinogen? ADCC效應(yīng)細胞株具有廣泛的適用性，可用于多種ADCC活性的抗體生物學活性檢測。

Log[CD20單 抗] , μg/ml

10-1 100 101 102 103

0

5

10

15 利妥昔單抗

FI

ADCC增強型CD20抗體

某廠家Biosimilar抗體

T: WIL2-S

Log[HER2單 抗] , μg/ml

T: BT-474

10-4 10-3 10-2 10-1 100 101 102 103

0

2

4

6

8

10 曲妥珠單抗

帕妥珠單抗

ADCC增強型抗體

FI

T: MDA-MB-175VII

10-4 10-3 10-2 10-1 100 101 102 103

0

2

4

6

8 曲妥珠單抗

FI

帕妥珠單抗

ADCC增強型抗體

Log[HER2單 抗] , μg/ml

T: A431

10-4 10-3 10-2 10-1 100 101 102

0

2

4

6

8

10

12

14

16

EGFR單抗(CHO)

FI

EGFR單抗(NSO)

帕尼單抗

Log[EGFR單 抗] , μg/ml

應(yīng)用廣泛：治療性抗體藥物的Fc功能學研究和產(chǎn)品質(zhì)控、ADCC作用機制研究；

適用性廣：該系統(tǒng)已完成針對懸浮或貼壁的多種靶細胞的適用性驗證，效果良好。

31 32

T

31 32

T

ADCP Reporter Bioassay

抗體依賴的細胞介導的細胞吞噬作用（Antibody-dependent cell-mediated phagocytosis, ADCP）是治療

性抗體對抗病毒感染或者腫瘤疾病的一種重要作用機制。在體內(nèi)，ADCP作用由單核細胞、巨噬細胞、中性粒

細胞以及樹突細胞通過其細胞表面表達的FcγRIIa、FcγRI、FcγRIIIa介導，其中FcγRIIa被認為是ADCP

作用過程中最主要的Fcγ受體。ADCP作用過程為抗體與靶細胞表面的抗原特異性結(jié)合，隨后抗體Fc片段與效

應(yīng)細胞（如巨噬細胞）表面Fcγ受體結(jié)合，誘導巨噬細胞吞噬靶細胞。

Rhinogen? ADCP Reporter Bioassay是一種生物發(fā)光報告基因檢測方法，用于檢測抗體的ADCP生物學活

性。其作用機理基于 NFA（Nuclear factor of activated T-cells）反應(yīng)通路。本系統(tǒng)采用基因工程改造

的Jurkat細胞作為效應(yīng)細胞，該細胞穩(wěn)定表達FcγRIIa受體（H131高親和力突變體）和由NFAT應(yīng)答元件驅(qū)

動表達的螢火蟲熒光素酶。抗體在識別靶細胞后，通過與效應(yīng)細胞表面FcγRIIa的結(jié)合，激發(fā)細胞內(nèi)NFAT反

應(yīng)元件，NFAT反應(yīng)元件則驅(qū)動螢火蟲熒光素酶的表達。熒光素酶活性通過生物發(fā)光進行定量。

Target Cell Effector cell NFAT Luciferase

NFAT Pathway

Antigen FcγRIIa

+Light

傳統(tǒng)ADCP檢測方法非常復(fù)雜，需要從外周血中分離單核細胞，并經(jīng)過多日培養(yǎng)分化得到巨噬細胞作為效應(yīng)細

胞。檢測時需要對效應(yīng)細胞及靶細胞進行免疫標記，通過流式細胞儀等手段探測效應(yīng)細胞對靶細胞的吞噬作

用。該方法變異性大、耗費人力、耗時長，不適合作為質(zhì)量控制方法。相較于傳統(tǒng)的ADCP檢測法，報告基因

法具有操作簡單、靈敏、準確性高、精密度高等優(yōu)點。目前報告基因檢測方法已被納入2015版中國藥典通則

3523，適用于重組單克隆抗體的功能學研究，表達篩選評價以及質(zhì)控放行標準方法建立。

表1. 傳統(tǒng)ADCP檢測法與報告基因檢測方法的對比：

傳統(tǒng)ADCP檢測法

方法 效應(yīng)細胞 操作 優(yōu)點 缺點

巨噬細胞

從外周血分離原代細胞（通常為單核細

胞），并經(jīng)過多日培養(yǎng)分化得到巨噬細

胞，檢測時需要對效應(yīng)細胞及靶細胞進

行免疫標記，通過流式細胞儀等手段探

測效應(yīng)細胞對靶細胞的吞噬作用。

確認抗體ADCP活性的經(jīng)典方法

操作復(fù)雜，變異性大，

耗時耗力，不適合作為

質(zhì)量控制方法

報告基因檢測方法 工程改造

Jurkat

基因工程改造Jurkat細胞作為效應(yīng)細

胞，該細胞穩(wěn)定表達FcγRIIa受體

（H131高親和力突變體）和由NFAT應(yīng)

答元件驅(qū)動表達的螢火蟲熒光素酶。

操作簡單、靈敏、準確性高、

精密度高，適合作為生產(chǎn)批簽

發(fā)指標（報告基因檢測方法已

被納入2015版中國藥典通則

3523）

不能真實反映體內(nèi)的作

用效果

Rhinogen? ADCP報告基因檢測系統(tǒng)提供的ADCP生物學活性檢測方法具有操作簡便、變異性低、靈敏度高等

特點，可用于針對不同靶細胞的抗體效應(yīng)功能檢測。

Rhinogen? ADCP報告基因檢測系統(tǒng)具有很高的特異性，只有當抗體與對應(yīng)的抗原表達靶細胞結(jié)合以后才能獲

得效應(yīng)細胞表面受體的應(yīng)答，而當抗體不能與靶細胞結(jié)合時不獲得應(yīng)答。

Log[抗體], μg/ml

10-4 10-3 10-2 10-1 100 101 102

0

5000

10000

15000

20000

25000

抗CD20單抗+Wil2-s

RLU

Trastuzumab+Wil2-s

10-4 10-3 10-2 10-1 100 101 102

0

10

20

30

40

50

60

70

抗CD20單抗+Wil2-s

FI

Trastuzumab+Wil2-s

Log[抗體], μg/ml

原理明確：基于抗體結(jié)合細胞對效應(yīng)細胞FcγRIIa受體信號通路的激活；

操作簡便：檢測過程簡單，檢測試劑易用；

圖2. Rhinogen? ADCP Reporter Bioassay檢測流程圖。

簡單易操作 無固有變異性 用時短

25μ l抗體 立即檢測光信號

25μ l靶細胞

25μ l效應(yīng)細胞

+Light

熒光素酶檢測試劑（RA-GL04）

Bio

Glory

孵育6-24hr@37℃，5%CO2

冷卻96孔板≥15min@室溫

檢測原理

產(chǎn)品特點

33 34

T

Log[抗體], μg/ml

10-4 10-3 10-2 10-1 100 101 102 103 104

0

2000

4000

6000

8000

10000

RLU

Trastuzumab+BT474

抗CD20單 抗+ BT474

-1 100 101 102 103 104

04

Log[抗體], μg/ml

10-4 10-3 10-2 10

0

3

6

9

12 Trastuzumab+BT474

FI

抗CD20單 抗+ BT474

Rhinogen? ADCP報告基因檢測系統(tǒng)具有很好的可重復(fù)性，同一個人在4天時間里對同一個樣品，分別在4塊96

孔板中進行操作，結(jié)果可重現(xiàn)。

10-4 10-3 10-2 10-1 100 101 102

0

3000

6000

9000

12000

15000 Repeat 1

RLU

Repeat 2

Repeat 3

Repeat 4

Log[抗CD20單抗], μg/ml

10 -4 10 -3 10 -2 10 -1 10 0 10 1 10 2

0

15

30

45

60

75 Repeat 1

FI

Repeat 2

Repeat 3

Repeat 4

Log[抗CD20單抗], μg/ml

抗CD20抗體μg/ml 0.047 0.047 0.051

0.039

EC50

Sample

Repeat 1 Repeat 2 Repeat 3

Repeat 4

Rhinogen? ADCP Reporter Bioassay 相關(guān)產(chǎn)品：

產(chǎn)品名稱

ADCP Reporter Bioassay, Core Kit RA-CK09 ADCP Bioassay效應(yīng)細胞 5×106

cells/ml

貨號 組成 規(guī)格 體積

1ml

應(yīng)用廣泛：治療性抗體藥物的Fc功能學研究和產(chǎn)品質(zhì)控、ADCP作用機制研究；

適用性廣：該系統(tǒng)已完成對懸浮或貼壁的多種靶細胞的適用性驗證，效果良好。

圖

PD-1（Programmed cell death protein 1）是一種在激活的T細胞和B細胞中表達的免疫抑制分子。腫瘤微環(huán)

境會誘導浸潤的T細胞高表達PD-1分子，腫瘤細胞上的PD-L1與T細胞上的PD-1結(jié)合，抑制T細胞增殖和活化，

使T細胞處于失活狀態(tài)，最終誘導免疫逃逸?？筆D-1或抗PD-L1生物制劑能阻斷PD-1與PD-L1的結(jié)合。

Rhinogen? PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay是一種生物發(fā)光報告基因檢測方法，本系統(tǒng)由工程化改造的雙細

胞系統(tǒng)組成。共培養(yǎng)兩種細胞系，通過T細胞受體（TCR）激活劑/TCR復(fù)合物的交聯(lián)誘導Jurkat NFAT途徑的活

化。靶細胞上的PD-L1與效應(yīng)細胞上的PD-1結(jié)合后，效應(yīng)細胞中的PD-1信號傳導抑制T細胞功能，并導致NFAT

途徑抑制?？筆D-1或抗PD-L1生物制劑阻斷PD-1與PD-L1的結(jié)合，以劑量依賴性方式重新激活NFAT途徑，進而

以劑量依賴性方式表達熒光素酶。

表1. 傳統(tǒng)方法與報告基因法（雙細胞系統(tǒng)）的對比：

抗PD-1/抗PD-L1生物制劑體外生物學活性的傳統(tǒng)檢測方法是使用原代人T細胞作為效應(yīng)細胞，測量原代人T細

胞的細胞增殖、細胞表面標志物的表達、細胞因子如IFNγ或IL-2的產(chǎn)生以及靶細胞的死亡。該方法操作復(fù)

雜，變異性大（依賴于供體原代細胞，不同個體差異大），耗時耗力（4-5天），不適合作為質(zhì)量控制的方

法。

效應(yīng)細胞：Jurkat-PD-1-NFAT/luc2

靶細胞 ：PD-L1 aAPC/CHO-K1 Cells

TCR與TCR Activator結(jié)合激活NFAT信

號通路;

PD-1與PD-L1結(jié)合抑制NFAT信號通路

的激活;

抗PD-1或抗PD-L1阻斷PD-1與PD-L1的

結(jié)合，以劑量依賴性方式重新激活NFAT途徑，進

而以劑量依賴性方式表達熒光素酶。 圖1. Rhinogen? PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay原理圖。

+Light

RE Luciferase

方法 效應(yīng)細胞 操作 優(yōu)點 缺點

傳統(tǒng)方法 原代人T細胞

測量原代人T細胞的細胞增殖、細胞

表面標志物的表達、細胞因子如IFN

γ或IL-2的產(chǎn)生以及靶細胞的死亡。

檢測機理真實體現(xiàn)抗

PD-1或抗PD-L1生物制

劑的作用效果。

操作復(fù)雜，變異性大

（依賴于供體原代細

胞，不同個體差異

大），耗時耗力（4-5

天），不適合作為質(zhì)

量控制的方法。

報告基因法

（雙細胞系統(tǒng)）

當兩種細胞株共孵育時，PD-1/PD-L1的結(jié)

合能夠抑制TCR活性，繼而抑制NFAT介導

的熒光素酶的表達，反應(yīng)體系無法檢測到

熒光信號。當在反應(yīng)體系中加入

PD-1/PD-L1抗體時，抗體與PD-1/PD-L1結(jié)

合可以劑量依賴性方式重新激活NFAT途

徑，進而檢測熒光信號。

操作簡單、靈敏、準確

性高、精密度高，適合

作為生產(chǎn)批簽發(fā)指標

（中檢院已成功開發(fā)了

檢測抗PD-1/抗PD-L1的

報告基因檢測法）

不能真實反映體內(nèi)的

作用效果

PD-1效應(yīng)細胞：

工程改造

Jurkat；

PD-L1靶細胞：

PD-L1 aAPC/

CHO-K1 Cells

EVENT 1：

EVENT 2：

EVENT 3：

PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay

35 36

T

圖3. 高適用性。

Opdivo

Keytruda

Anti-PD-1

Negative Control

圖4. 高特異性。

Anti-VEGF

Anti-PD-1

Anti-Her2

原理明確：基于阻斷PD-1 / PD-L1相互作用

的生物制劑的作用機制（MOA）；

操作簡單：檢測過程簡單，耗時短，檢測試

劑易用；

特異性高：僅對抗PD-1或抗PD-L1生物阻斷

劑有響應(yīng)；

方法穩(wěn)定：靈敏、準確性高、精密度高，適

合作為生產(chǎn)批簽發(fā)指標。 圖5. 良好的線性范圍。

Rhinogen? PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay相關(guān)產(chǎn)品：

PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay

PD-1 Effector Cells（1×107cells/ml）

PD-L1 a APC/CHO-K1 Cells（1×107cells/ml）

產(chǎn)品名稱

RA-CK16

貨號 規(guī)格 體積

1ml

1ml

簡單易操作 無固有變異性 用時短

加入抗體

100μ l/孔PD-L1

aAPC/CHO-K1 Cells

加入效應(yīng)細胞

+Light

熒光素酶檢測試劑（RA-GL04）

Bio

Glory

37℃，5% CO2孵育6h室溫

平衡96孔板5-10min

孵育96孔板2-5min@室溫

螢火蟲熒光素酶（Firefly Luciferase）是一種分子量為61kDa的蛋白，因其在宿主細胞中無背景螢光，同時

無需翻譯后修飾，是報告基因的理想選擇。

螢火蟲熒光素酶分析試劑盒系列產(chǎn)品是針對螢火蟲熒光素酶開發(fā)的一款快速、穩(wěn)定的一步法檢測試劑盒，以D熒光素（D-luciferin）為底物，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以被螢火蟲熒光素酶催化進行氧化

脫羧反應(yīng)，產(chǎn)生激活態(tài)的氧化熒光素（Oxyluciferin），并產(chǎn)生生物螢光（Bioluminescence）。生物螢光與

熒光素酶的啟動子活性成比例，間接反映了細胞刺激物的生物學活性。

Firefly Luciferase

D-luciferin

室溫孵育25min后，

檢測光信號

25μ l ADCC/

ADCP待測體系

加入75μ l

底物

底物試劑

產(chǎn)品名稱 半衰期 靈敏度 規(guī)格

Bio-BrightTM One-Step

螢火蟲熒光素酶

分析試劑盒

貨號 規(guī)格

Bio-GloryTM One-Step

螢火蟲熒光素酶

分析試劑盒

Bio-OneTM One-Step

螢火蟲熒光素酶

分析試劑盒

Bio-SteadyTM One-Step

螢火蟲熒光素酶

分析試劑盒

50ml

RA-GL04

50ml

50ml

30min 超高

60min 超高

60min 高

＞5h 中

用于ADCC或ADCP活性檢測體系以及對靈敏度有特殊要

求的其他檢測項目。

●

適用于高通量和超高通量（96/384/1536孔）的檢測哺

乳動物細胞中螢火蟲熒光素酶報告基因的表達。

●

適用于需要超高光輸出信號的螢火蟲熒光素酶報告基

因系統(tǒng)。

●

適用于高通量和超高通量（96/384/1536孔）的檢測哺

乳動物細胞中螢火蟲熒光素酶報告基因的表達；

可用于小分子化合物、重組蛋白藥物活性的常規(guī)檢測。

●

●

檢測原理

產(chǎn)品特點

產(chǎn)品列表

操作流程

操作流程

RA-GL05

RA-GL06

RA-GL07

50ml

37 38

T

報告基因檢測常見問題與解決方案

以利妥昔單抗ADCC Bioassay 模型考察Bio-GloryTM One-Step螢火蟲熒光素酶分析試劑盒的凍融穩(wěn)定性，經(jīng)過

11次反復(fù)凍融后，試劑檢測性能，包括熒光值（圖B1）及半衰期（圖B2）無明顯降低趨勢。

圖B1 熒光值對比 圖B2 半衰期對比

以利妥昔單抗ADCC Bioassay 模型對比檢測Bio-GloryTM One-Step螢火蟲熒光素酶分析試劑盒與進口品牌同

款產(chǎn)品，熒光值（圖A1）稍高于進口品牌同款產(chǎn)品；半衰期（圖A2）與進口品牌同款產(chǎn)品相當。

圖A1 熒光值對比 圖A2 半衰期對比

發(fā)光值衰減對比

讀數(shù)時間，min

Bio-OneTM One-Step

Bio-BrightTM One-Step

Bio-SteadyTM One-Step

圖C 三款試劑盒型性能對比

目前我們的ADCC檢測系統(tǒng)沒有384孔板的應(yīng)用案例，我們的數(shù)據(jù)都是在96孔板中進行檢測得到的。但就從原理上來說，我

們的ADCC系統(tǒng)是可以用于384孔板的。但對于384孔板，由于孔的容積小，可能需要著重優(yōu)化單孔細胞數(shù)量以及細胞的種

板密度（包括靶細胞及效應(yīng)細胞）。

Q1：ADCC系統(tǒng)（貨號：RA-CK01）是否適用于384孔板？

細胞培養(yǎng)時可以使用有酚紅的培養(yǎng)基，后續(xù)檢測時由于酚紅的顏色會對檢測本底值有影響，所以建議換成無酚紅培養(yǎng)基

進行。

Q2：細胞培養(yǎng)是否需要加抗性？

相較于傳統(tǒng)的ADCC檢測方法，報告基因檢測法采用的是可擴增的效應(yīng)細胞系，以及結(jié)合了生物發(fā)光檢測技術(shù)，通過測量

信號通路的變化來定量檢測抗體Fc端的功能。熒光的檢測可以放大信號，誤差小，重復(fù)性好，靈敏度高，更穩(wěn)定，適用

于從前期細胞株篩選到批簽發(fā)質(zhì)控的抗體ADCC功能檢測。是單克隆抗體活性研究及質(zhì)量控制的重要手段，可作為常規(guī)放

行方法，報告基因檢測法已被納入了2015版中國藥典。

Q3：相比于傳統(tǒng)的ADCC檢測方法，報告基因法的優(yōu)勢是什么？是不是可以更準確的模擬體

-- 內(nèi)的藥效？

是的，我們完全按照藥典的要求對ADCC測活細胞株進行質(zhì)量控制，包括無菌檢查（無菌），支原體檢測（支原體陰性）

及對細胞進行功能性鑒定，檢定的COA 文件會和細胞同時提供。

Q4：是否按照2015版《中國藥典》規(guī)定的，對于檢測用細胞株進行全面檢定的COA文件？

性能對比

產(chǎn)品特點

39 40

T

細胞活力檢測 細胞活力檢測

檢測原理操作流程

產(chǎn)品列表

單克隆抗體藥物的體外生物學活性檢測是對抗體類藥物有效成分以及效價進行

測定，是單抗藥物質(zhì)量控制中非常重要的一環(huán)，生物學活性檢測貫穿蛋白藥物

整個生命周期，從早期靶點的發(fā)現(xiàn)，抗體的篩選，再過渡至CMC階段進行生

產(chǎn)、臨床應(yīng)用，到最后上市，都會涉及生物活性的分析。因此，選擇高效、快

速、準確的生物活性測定方式極為重要。

RhinoBio提供細胞活力檢測試劑：Cell Titer Turbo 2.0 Luminescent Cell

Viability Assay和Cell Titer Turbo 3D Luminescent Cell Viability Assay；

細胞活性檢測染料：Resazurin細胞活性檢測染料和CCK-8細胞活性檢測染

料，助力您的藥物研發(fā)。

03

三磷酸腺苷（Adenosine Tri-Phosphate, ATP）是自然界中各種生命活動中共用的能量載體，是能量儲存

和轉(zhuǎn)移的最小單位。ATP參與生物體內(nèi)多種酶促反應(yīng)，維持正常的生命活動，是活細胞新陳代謝的一個指

標。ATP是細胞內(nèi)最重要的能量分子，可以用來衡量細胞新陳代謝水平，并與活細胞數(shù)目具有良好的線性關(guān)

系，因此，可通過ATP含量反應(yīng)活細胞的數(shù)目。通過監(jiān)測ATP含量改變，可以評價多種藥物、生物制劑或

生物活性物質(zhì)引起的細胞殺傷、細胞抑制和細胞增殖作用。ATP含量的增高也常作為微生物繁殖引起食品、

藥品污染的一個重要指標。

Rhinogen? Cell Titer Turbo 2.0 Luminescent Cell Viability Assay借助ATP依賴的熒光素酶催化的

熒光素發(fā)光反應(yīng)，通過化學發(fā)光信號測定細胞內(nèi)ATP含量，從而檢測細胞活力或定量檢測活細胞數(shù)目。

CELL TITER TURBO 2.0 LUMINESCENT CELL

VIABILITY ASSAY

Luciferase

Lyse Cell

Cell Titer Turbo 2.0 Luminescent Cell Viability Assay

Cell Titer Turbo 3D Luminescent Cell Viability Assay

2*50ml

產(chǎn)品名稱 規(guī)格

2*50ml

RA-GL11-A

貨號

RA-GL12-A

ff

fl







加入試劑

檢測光信號

Cell viability assay

Rhinogen?

41 42

T

產(chǎn)品特點 細胞活性檢測染料檢測原理

2μM ATP條件下，加入等體積的Cell Titer Turbo 2.0(以下簡稱“CTT 2.0”)及其它公司競品，震蕩

2min，靜置10min后持續(xù)檢測，熒光值隨時間變化的情況，結(jié)果如圖C和圖D所示。不管是初始熒光值還是半

衰期，CTT 2.0均明顯優(yōu)于競品。

圖C. 熒光值隨時間衰減情況對比 圖D. 最大熒光值與半衰期對比

圖A. 靈敏度測試 圖B. 線性度測試

圖1. Rhinogen? Resazurin細胞活性檢測的原理。

靛青藍色 粉紅色熒光

終產(chǎn)物

HO O O

O

NADH/H+ NAD+

/H2

O

N

+ +

刃天青

Viable cell +

-

HO O O

O

N

試鹵靈

圖1. Rhinogen? CCK-8細胞活性檢測的原理。

substrates electron mediator

reduced form colorless

orange color

electron mediator cell

NAD Rhiongen?CCK-8

Rhiongen?CCK-8

formazan

NADH

dehydrogenases

產(chǎn)品名稱 Resazurin細胞活性檢測染料 CCK-8細胞活性檢測染料

貨號 QDY-002-C

規(guī)格 25ml/1250-2500孔

QDY-002-D

100ml/5000-10000孔

檢測原理

QDY-003-C

25ml/2500孔

QDY-003-D

100ml/10000孔

細胞內(nèi) NADPH/ NADP、FADH/FAD、FMNH/FMN 和

NADH/NAD 的比值升高，處于還原環(huán)境，攝入細胞內(nèi)的

刃天青（Resazurin）被這些代謝中間體及細胞色素類

還原成試鹵靈后釋放到細胞外并溶于培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)

基從無熒光的靛青藍變成有熒光的粉紅色。

試劑含有WST-8【化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)

-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉

鹽）】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲

酯（1-Methoxy PMS）的作用下被細胞線粒體中的脫氫

酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物

（Formazan）。

活性判斷 檢測到的吸光度和熒光強度與活性細胞數(shù)成正比 生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比

涉及儀器 普通分光光度計或熒光光度計 酶聯(lián)免疫檢測儀

43 44

T

細胞活力檢測常見問題與解決方案

產(chǎn)品特點

可以，向各孔中加入培養(yǎng)基體積10%的CCK-8溶液，如果加入的CCK-8體積太少，可以先將

CCK-8溶液稀釋1倍，然后加入培養(yǎng)基體積20%的量。

Q1：CCK-8細胞活性檢測染料（貨號：QDY-003）能否用384孔板進行試驗？

不會，培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此

不會對檢測造成影響。

Q2：使用CCK-8細胞活性檢測染料（貨號：QDY-003）檢測時，會被酚紅影響嗎？

當有還原性物質(zhì)存在時會影響CCK8的測定，例如含有維生素C的Glucose等 （一般培養(yǎng)基中

的量不多，酚紅或血清不影響測定）。在有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收，但不影響

測定，扣除空白吸收即可。

Q3：哪些物質(zhì)會影響CCK-8細胞活性檢測染料（貨號：QDY-003）的測定？

可以在加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑并混勻后加樣，或者采用一次性低吸附槍頭。

Q4：如何減少由于CCK-8試劑在槍頭上或孔壁上的殘留所帶來的誤差？

Rhinogen? CCK-8試劑與某進口主流品牌

同款產(chǎn)品用于EPO的體外生物學活性檢

測，隨著EPO的濃度增高，活細胞的數(shù)量

也逐漸增高，450nm波長處測定其光吸收

值，吸光度值與活細胞的數(shù)量呈正比。

結(jié)果顯示：在相同條件下，兩者具有相

同的使用效果（如圖B1）。

Rhinogen? CCK-8試劑用于帕妥珠單抗的體

外生物學活性檢測時：在一定范圍內(nèi)，不

同濃度的帕妥珠單抗對HER2高表達細胞株

的體外生長抑制作用具有量效關(guān)系（如圖

B2）。

10-2 10-1 100 101 102

0.0

0.6

1.2

1.8

2.4

3.0 Perjeta

O

D450/630

KJ008-帕妥 珠單抗

Log[帕妥 珠單抗], ng/ml

B2

Rhinogen? Resazurin細胞活性檢測染料

試劑和某進口主流品牌同款產(chǎn)品用于西

妥昔單抗的體外生物學活性檢測，西妥

昔單抗與EGFR的胞外結(jié)合域結(jié)合，會抑

制二聚體的形成從而抑制受體介導的信

號轉(zhuǎn)導通路，在一定范圍內(nèi)，不同濃度

的西妥昔單抗對EGFR高表達細胞株的體

外生長抑制作用具有量效關(guān)系。結(jié)果顯

示：相同條件下二者具有相同的使用效

果（如圖A）。

10-2 10-1 100 101

3000

4000

5000

6000

7000

8000

9000 Invitrogen

Fluorescence intensity

Rhinogen

Log[活性樣品], μg/ml

A 進口品牌

10-2 10-1 100 101 102

0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5 DOJINDO

O

D450/630

Rhinogen

Log[EPO], ng/ml

B1 進口品牌 進口品牌

45 46

T

激酶活性檢測試劑盒

操作流程

Rhinogen?

蛋白激酶在多種細胞事件的調(diào)節(jié)中起著至關(guān)重要的作用，細胞中激酶缺乏受控活

性被認為是造成所有主要人類病理狀況的原因，例如癌癥、心血管疾病、神經(jīng)退

行性疾病和代謝紊亂，因此它已在廣泛研究中被用作腫瘤治療的靶點。

RhinoBio推出Rhinogen? Kinase-TurboTM 激酶活性檢測試劑盒，助力您的藥

物研發(fā)。

蛋白激酶在多種細胞事件的調(diào)節(jié)中起著至關(guān)重要的作用，已知至少有1200種蛋白激酶參與細胞功能的調(diào)

節(jié)。

激酶通過磷酸化其各自的下游特定底物蛋白來發(fā)揮其作用，它們催化ATP或GTP的γ-磷酸轉(zhuǎn)運到底物蛋白中

絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的羥基或脂質(zhì)中的糖基部分，并啟動一系列激活控制事件，包括細胞的生長、分

化、分裂和腫瘤促進。

Rhinogen? Kinase-TurboTM 激酶活性檢測試劑盒是一種通過化學發(fā)光法測定激酶反應(yīng)后溶液中ATP的剩余

量，從而進行定量來檢測激酶活性的試劑盒。激酶在反應(yīng)過程中會催化ATP上的磷酸基團轉(zhuǎn)移到底物的羥基

上，從而使ATP轉(zhuǎn)變?yōu)锳DP，以此根據(jù)ATP的減少量來定量激酶的活性。本試劑盒借助ATP依賴的熒光素酶催化

的熒光素發(fā)光反應(yīng)，通過化學發(fā)光信號測定激酶反應(yīng)體系內(nèi)的ATP含量（如圖A1）。這樣就可以通過設(shè)置ATP

的標準曲線，來定量激酶反應(yīng)體系中的ATP量，從而計算ATP的減少量，最終計算出激酶的活性。激酶的活性

與ATP剩余量成反比，即ATP剩余量越少，發(fā)光值越低，激酶活性就越高；若ATP剩余量越多，發(fā)光值就越

高，激酶活性則越低。

A

Kinase-TurboTM

激酶活性檢測試劑盒

加入試劑

振蕩混勻

激酶活性檢測 激酶活性檢測

Kinase activity assay

47 48

T

產(chǎn)品特點

產(chǎn)品應(yīng)用

產(chǎn)品列表

Rhinogen? Kinase-TurboTM 激酶

活性檢測試劑盒可以適用最高濃度

為10μM的ATP，且在0-10μM范圍內(nèi)

線性呈現(xiàn)良好（如圖B1）；Rhinogen? Kinase-TurboTM Plus激酶活

性檢測試劑盒可以適用最高濃度為

100μM的ATP，并在0 -100μM范圍

內(nèi)線性呈現(xiàn)良好（如圖B2）；

Rhinogen? Kinase-TurboTM Max激

酶活性檢測試劑盒可以適用最高濃

度為500μM的ATP，在0-500μM范

圍內(nèi)線性呈現(xiàn)良好（如圖B3）。

B1

B2

B3

可用于檢測蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和糖等物質(zhì)的激酶活性，適用多種激酶和激酶底物組合檢測。

可使用較高的ATP濃度：線性響應(yīng)高達500μM ATP；

可以檢測多種激酶和激酶底物組合，包括肽、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和糖底物；

可檢測已知激酶抑制劑，且能區(qū)分ATP競爭性和ATP非競爭性激酶抑制劑；

可在不處理底物的情況下直接進行分析；

進行批量處理，高度穩(wěn)定的發(fā)光信號，3小時左右仍能保持50%以上的信號；

用這種快速、均勻、無放射性的檢測方法篩選大量文庫化合物。

●

●

●

●

●

●

Kinase-TurboTM 激酶活性檢測試劑盒

10ml

產(chǎn)品名稱 規(guī)格

RA-GL13-A

RA-GL13-B 10*10ml

貨號

Kinase-TurboTM Plus激酶活性檢測試劑盒

RA-GL14-A 10ml

RA-GL14-B 10*10ml

Kinase-TurboTM Max激酶活性檢測試劑盒

RA-GL15-A 10ml

RA-GL15-B 10*10ml

49 50

T

CHO宿主細胞蛋白測試劑盒

檢測列表

操作流程

RhinoBio殘留檢測系列主要包括核酸酶殘留檢測—NucleCutTM 核酸酶殘留

ELISA檢測試劑盒和宿主細胞蛋白殘留檢測—CHO宿主細胞蛋白檢測試劑盒。

Rhinogen?

殘留檢測 殘留檢測

Residue detection

大多數(shù)生物藥物都是通過DNA重組技術(shù)，使用宿主細胞表達目標蛋白。CHO細胞使生物制藥行業(yè)最常用的生產(chǎn)用哺乳動物宿主細胞

系。在實際使用中，宿主細胞本身會大量表達蛋白質(zhì)，因此目標蛋白會受到來源于宿主細胞的蛋白雜質(zhì)污染，這些宿主細胞蛋白

的存在不僅會降低藥物療效，而且有導致患者發(fā)生不良免疫原性反應(yīng)的重大風險。因此，檢測蛋白樣品中HCP殘留含量，并優(yōu)化

工藝降低HCP至可接受水平，是保證藥物安全性和獲得監(jiān)管機構(gòu)認證的關(guān)鍵。

各國相關(guān)法規(guī)對HCP的殘留檢測都有相應(yīng)的要求。ELISA法是各國藥典推薦方法，美國FDA建議含量＜100ppm，中國藥典重組疫苗

各論建議CHO細胞HCP＜0.05％。

本試劑盒中HCP抗體為免抗，并經(jīng)過特殊工藝純化獲得，2D/WB抗體覆蓋度約為80％。且為通用試劑盒，可用于大多數(shù)CHO細胞表

達系統(tǒng)的工藝開發(fā)喝質(zhì)量控制。

通過ELISA方法和辣根過氧化物酶催化TMB底物產(chǎn)生顏

色反應(yīng)，酶標儀450nm波長讀取數(shù)值。利用CHO標準蛋

白標準曲線來定量分析待測樣品中HCP的含量。

TMB

Substrate

reaction

HRP

Streptavidin

Biotin

HCP

18-25℃，約20min

1.試劑盒室溫平衡

6.將Biotion-HCP抗體按照100μL/

孔加入酶標板中，蓋上96孔板蓋，

室溫靜置孵育約45min

300μL/孔,重復(fù)6次

5.使用洗板液(1X)洗板

300μL/孔,重復(fù)6次

7.使用洗板液(1X)洗板

波長為450nm

12.20min內(nèi)使用酶標儀讀數(shù)

標準曲線的濃度范圍

為1-200ng/mL

13.四參數(shù)擬合數(shù)據(jù)

100μL/孔，蓋上96孔板蓋

8.加入Streptavidin-HRP室溫靜置孵30min

100μL/孔，蓋上96孔板蓋

10.加入TMB顯色液室溫避光靜置孵育10min

標準品、待測樣品和質(zhì)控

樣品100μL/孔，每個樣

品兩復(fù)孔或三復(fù)孔,蓋上

96孔板蓋

4.加樣，室溫靜置孵育90min

加樣

待測樣品稀釋至3~10mg/mL,首次測

定時建議通過梯度稀釋確定最小稀

釋倍數(shù),使得HCP<200ng/mL

2.待測樣品制備

待測樣品 稀釋樣品

3.質(zhì)控樣品制備(可選)

300μL/孔,重復(fù)6次

9.使用洗板液(1X)洗板

100μL/孔

11.加入終止液

51 52

T

產(chǎn)品特點

產(chǎn)品列表

靈敏度高，線性良好：靈敏≤ 1ng/ml，標準曲

線的R2＞0.98；

專屬性好，準星度高，抗干擾能力強；

●

●

表1.Rhinogen? CHO宿主細胞蛋白檢測試劑盒的檢測標準

曲線在1-200ng/ml的范圍內(nèi)，線性良好（R2=0.998）；

靈敏度可達到1ng/ml：

1

3

10

30

100

200

0.83

3.32

11.7

28.5

101.1

199.8

83%

109%

117%

95%

101%

100%

2.9

1.3

0.6

7.5

2.3

1.4

標準品濃度

（ng/mL）

回算濃度

（ng/mL） 回收率 CV%

表2.單抗A的濃度范圍為1-50mg/ml，與10ng/ml的HCP

進行等體積混合后檢測，HCP的回收率在88%-99%范圍

內(nèi)，CV%在0.2%-5.2%范圍內(nèi)，單抗A的最小稀釋倍數(shù)

（MRD）為1倍：

80%

89%

100%

86%

78%

86%

加標

回收率

5.9

3.5

1.5

5.5

0.9

2.8

CV%

137%

119%

2.5

1.4

107% 0.5

單抗

單抗A

單抗B

單抗C

2.4

8.9

29.9

2.8

7.8

28.2

HCP實測值

（ng/ml）

4.2

11.9

32.1

3

3

3

3

3

3

蛋白濃度

（mg/mL）

3

3

3

3

10

30

3

10

30

HCP加標

終濃度

（ng/mL）

3

10

30

表3.將3種單抗A、B和HCP標準品等體積加標，抗體終濃度

為3mg/ml，HCP濃度分別為3、10和30ng/ml，檢測HCP 的

回收率在78%-137%范圍內(nèi)，CV%在0.4%-5.9%范圍內(nèi)：

CHO宿主細胞蛋白檢測試劑盒 RA-IP01

產(chǎn)品名稱 貨號

96 Tests

規(guī)格

圖A. 標準曲線示例

92%

88%

98%

103%

98%

92%

加標

回收率

5.2

1.8

2.7

1.2

3.5

0.2

CV%

108%

99%

0.9

1.4

50

25

10

8

6

4

單抗A濃度

（mg/mL）

2

1

10

10

10

10

10

10

HCP加標

終濃度

（ng/mL）

10

10

9.18

8.77

9.81

10.3

9.75

9.19

HCP實測值

（ng/ml）

10.8

9.93

支原體（Mycoplasma）是對支原體科，無膽甾原體科和螺原體科的原核生物

總稱，是已知可以自由生活的最小生物，沒有細胞壁，形狀多樣可變，直徑一

般是0.1～0.3μm，基因組A-T含量高，對常見的抗生素不敏感，對熱敏感。細

胞如果受到支原體污染，細胞生長速度變慢，細胞產(chǎn)生病變或形態(tài)改變。連續(xù)

培養(yǎng)細胞污染的概率大約15~35%，人員操作、污染的細胞、原輔料（血清、胰

酶、培養(yǎng)基）、實驗環(huán)境污染（生物安全柜、細胞間、培養(yǎng)箱）、實驗儀器

（水浴鍋、液氮罐）、實驗耗材（培養(yǎng)皿、方瓶、細胞工廠）都可能是污染

源。污染了的細胞一方面對生產(chǎn)帶來巨大影響，另外如果細胞產(chǎn)品、蛋白產(chǎn)

品、病毒類產(chǎn)品受到支原體污染，最終會給患者帶來潛在的健康風險。

RhinoBio推出MycoAlarm? 支原體檢測試劑盒和Myco-Visal? 一步法快速支

原體檢測試劑盒助力您的微生物檢測。

Rhinogen?

支原體檢測 支原體檢測

Detection of mycoplasma

53 54

T

產(chǎn)品特點 產(chǎn)品列表

常見問題

MycoAlarm? 支原體檢測試劑盒 Myco-VisalTM 一步法快速支原體檢測試劑盒

Rhinogen? MycoAlarmTM 支原體檢測試劑盒采用生化方法進行支原體檢測。利用支原體特有的ATP合成相關(guān)

酶，在底物存在的情況下可以轉(zhuǎn)化ADP為ATP。存活的支原體溶解后，釋放大量的酶和底物反應(yīng)，促進ADP轉(zhuǎn)

化為ATP，提供一種快速、靈敏的樣品檢測方法。通過對比加入底物后樣品ATP含量的變化檢測，即可通過

前后含量變化比例來確定有無支原體。其反應(yīng)如下：

圖A1

Rhinogen產(chǎn)品有更強的發(fā)光值，可以

兼容更低靈敏度的發(fā)光設(shè)備。

圖A2

Rhinogen產(chǎn)品具備與競品相同檢出

限值的靈敏度。

A1

A2

Rhinogen? Myco-VisalTM 一步法快速支原體檢測試劑

盒是針對細胞培養(yǎng)物支原體污染快速檢測的試劑，使用

簡單便捷，只需吸取1μl細胞培養(yǎng)液上清加入反應(yīng)體系

中，65℃孵育1小時，肉眼觀察即可判定結(jié)果。

65℃反應(yīng)60min后，立刻取出反應(yīng)管，在光線良好的環(huán)

境中觀察（建議以白紙或白色背景），通過反應(yīng)管溶液

顏色的變化，即可判斷檢測結(jié)果。如果溶液為天藍色，

則說明有支原體污染（陽性）。如果為紫色，則說明沒

有支原體污染（陰性）。如圖B所示：

25T

產(chǎn)品名稱 規(guī)格

RA-MT01-25T

MycoAlarm? 支原體檢測試劑盒 RA-MT01-50T 50T

RA-MT01-100T 100T

貨號

Myco-Visal? 一步法快速支原體檢測試劑盒

RA-MT03-20T 20T

RA-MT03-50T 50T

可能是實驗操作污染。皮膚表面有大量的ATP存在，可能會導致污染和高讀值。出現(xiàn)這種情況建議實驗人員戴手套操作。

Q1：MycoAlarm? 支原體檢測試劑盒檢測背景值高的原因有哪些？

因為支原體是普遍存在的，所以在實驗過程中環(huán)境中的支原體也可能污染樣品，其次酶的反應(yīng)可能也會有干擾。因此檢

測結(jié)果在1.0-1.2的區(qū)間時，建議再培養(yǎng)24小時后再進行檢測。

Q2：MycoAlarm? 支原體檢測試劑盒檢測結(jié)果臨界比值（~1）該如何判斷是否有污染？

反應(yīng)體系中加入樣品量為1μl，體量較小，如果樣品顏色不是很深，一般情況下不會影響結(jié)果。

Q3：使用Myco-Visal? 一步法快速支原體檢測試劑盒時，如果樣品本身有顏色是否會影響最

--- 終結(jié)果的變色反應(yīng)嗎？

B

OH

ATP

COO S N

N S

+ O2 +

OH

AMP PPi CO2

O S N

N S

+ + +

Luciferin (熒光素） Oxyluciferin (氧化熒光素）

熒光素酶（Luciferase)

Mg2+

+Light 反應(yīng)原理

55 56

T

組織解離酶

組織解離酶 組織解離酶

Tissue dissociating enzyme

組織解離酶能夠在實驗室條件下將細胞或組織分解為單個細胞，從而使細胞和

組織的結(jié)構(gòu)被打散。組織解離酶主要用于細胞和組織的分離、純化或研究過程

中。使用適當?shù)慕M織解離酶，可以有效地釋放細胞和組織中的細胞間連接、細

胞外基質(zhì)和其他細胞附屬物。

RhinoBio提供一系列組織解離酶：胰蛋白酶、重組人透明質(zhì)酸酶、重組膠原酶

G、重組膠原酶H和嗜熱菌蛋白酶，以及組織解離試劑盒：大鼠肝臟細胞分離試

劑盒、小鼠胰島細胞分離試劑盒和軟骨細胞分離試劑盒等。

胰蛋白酶

QIP-003-A 20μg 胰蛋白酶是利用重組大腸桿菌系統(tǒng)重組表達并經(jīng)過多步層析純化

得到重組胰蛋白酶；

該酶經(jīng)過甲基化修飾及突變，保證不自切，從而去除了因自切產(chǎn)

QIP-003-B 5×20μg 生的假糜蛋白酶活性。

產(chǎn)品名稱 貨號 規(guī)格 產(chǎn)品詳情

重組人透明質(zhì)酸酶

RA-PH20-A 1500U 重組人透明質(zhì)酸酶是采用重組DNA技術(shù)，使用CHO細胞高表達，經(jīng)

過高度純化得到的重組人透明質(zhì)酸酶；

生產(chǎn)全程不接觸動物源性成分，最適pH為6.0-7.5；

適用于組織解離，可將主要包含在基質(zhì)中的透明質(zhì)酸降解分解，

從而促進組織細胞之間的分離。 RA-PH20-B 5×1500U

重組膠原酶H

RA-COL04-A 150U

RA-COL04-B 255U

重組膠原酶G

RA-COL03-A 30U

RA-COL03-B 60U

重組膠原酶G來源于溶組織梭菌C. histolyticum，利用E.coli

系統(tǒng)重組表達生產(chǎn)；

可用于不同功能細胞的解離，具有純度高、穩(wěn)定性好、批間差異

小及無動物源性等特點。

重組膠原酶G來源于溶組織梭菌C. histolyticum，利用E.coli 系

統(tǒng)重組表達生產(chǎn)；

可用于不同功能細胞的解離，具有純度高、穩(wěn)定性好、批間差異

小及無動物源性等特點。

嗜熱菌蛋白酶

RA-COL05-A 25mg 重組膠原酶G來源于溶組織梭菌C. histolyticum，利用E.coli 系

統(tǒng)重組表達生產(chǎn)；

可用于不同功能細胞的解離，具有純度高、穩(wěn)定性好、批間差異

RA-COL05-B 100mg 小及無動物源性等特點。

●

●

●

●

●

●

●

●

●

●

●

●

Rhinogen?

高純度：純度≥95％（如圖1、圖2）；

低內(nèi)毒素：對細胞無副作用；

高穩(wěn)定性：每批產(chǎn)品都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制，以實現(xiàn)產(chǎn)

品批間穩(wěn)定性。

可應(yīng)用于不同功能細胞的解離或消化。

圖1. 重組膠原酶G純度質(zhì)譜圖 圖2. 重組膠原酶H純度質(zhì)譜圖

產(chǎn)品特點

●

● ●

產(chǎn)品應(yīng)用

57 58

T

組織解離試劑盒

成年大鼠心肌細胞

（150-200gr）

分離試劑盒

RA-COL06

重組膠原酶G

重組膠原酶H

嗜熱菌蛋白酶

重組膠原酶G

重組膠原酶H

嗜熱菌蛋白酶

210U

1050U

1050μg

將重組膠原酶G溶解在1.5ml無菌水中，均分3份 500μl/份

（每份為溶液A）并儲存在-20°C；

將重組膠原酶H溶解在 3ml 無菌水中，均分3份 1ml/份（每份

為溶液B）并儲存在-20°C；

將嗜熱菌蛋白酶溶解在1.5ml無菌水中，均分3份 500μl/份

（每份為溶液C) 并儲存在-20°C；

一份溶液A+溶液B+溶液C用作一只成年大鼠心肌細胞分離。

大鼠肝臟細胞

分離試劑盒 RA-COL07

300U

1350U

將重組膠原酶G溶解在1.5ml無菌水中，均分3份 500μl/份

（每份為溶液A）并儲存在-20°C；

將重組膠原酶H溶解在 3ml 無菌水中，均分3份 1ml/份（每份

為溶液B）并儲存在-20°C；

將嗜熱菌蛋白酶溶解在1.5ml無菌水中，均分3份 500μl/份

（每份為溶液C) 并儲存在-20°C；

1.5mg 一份溶液A+溶液B+溶液C用作一只大鼠的肝臟細胞分離。

產(chǎn)品名稱 貨號 組分 規(guī)格 產(chǎn)品詳情

重組膠原酶H

嗜熱菌蛋白酶

重組膠原酶G

重組膠原酶H

嗜熱菌蛋白酶

重組膠原酶H

嗜熱菌蛋白酶

210U

1050U

1050μg

將重組膠原酶G溶解在900μl無菌水中，均分3份 300μl/份

（每份為溶液A）并儲存在-20°C；

將重組膠原酶H溶解在300μl無菌水中，均分3份 100μl/份

（每份為溶液B）并儲存在-20°C；

將嗜熱菌蛋白酶溶解在150μl無菌水中，均分3份 50μl/份

（每份為溶液C) 并儲存在-20°C；

一份溶液A+溶液B+溶液C用作一只成年小鼠的胰島細胞分離。

小鼠胰島細胞

分離試劑盒 RA-COL09

將重組膠原酶H溶解在1.5ml無菌水中，均分3份 500μl/份

（每份為溶液B）并儲存在-20°C；

將嗜熱菌蛋白酶溶解在300μl無菌水中，均分3份 100μl/份

（每份為溶液C) 并儲存在-20°C；

一份溶液A+溶液B用于1g脂肪組織MsCs分離。

脂肪組織的MSCs

分離試劑盒 RA-COL11

900U

300μg

軟骨細胞分離試劑盒 RA-COL10

900U 將重組膠原酶H溶解在1.5ml無菌水中，均分3份 500μl /份

（每份為溶液B）并儲存在-20°C；

將嗜熱菌蛋白酶溶解在300μl無菌水中，均分3份 100μl/份

（每份為溶液C) 并儲存在-20°C；

750μg 一份溶液A+溶液B用于1g軟骨組織的消化。

重組膠原酶G

重組膠原酶H

嗜熱菌蛋白酶

120U

510U

300μg

大鼠胰島細胞

分離試劑盒 RA-COL08

將重組膠原酶G溶解在 1.8ml無菌水中，均分3份 600μl/份

（每份為溶液A）并儲存在-20°C；

將重組膠原酶H溶解在600μl無菌水中，均分3份 200μl /份

（每份為溶液B）并儲存在-20°C；

將嗜熱菌蛋白酶溶解在300μl無菌水中，均分3份 100μl/份

（每份為溶液C) 并儲存在-20°C；

一份溶液A+溶液B+溶液C用作一只成年大鼠的胰島細胞分離。

●

●

●

●

●

●

●

●

●

●

●

●

●

●

●

●

●

●

●

●

●

● 重組抗原&其他產(chǎn)品Recombinant antigen&Other products

59 60

T

FC受體

重組抗體

重組抗原

QMA-007

貨號

重組抗人IgG（Fc）納米抗體（Fluorescein標簽）

產(chǎn)品名稱

QRE-133

貨號

重組人FcγR（I His標簽）

產(chǎn)品名稱

QRE-134

貨號

重組人FcγRIIa 131R（His標簽）

QRE-135 重組人FcγRIIa 131H（His標簽） QRE-136 重組人FcγRIIb（His標簽）

QRE-137 重組人FcγRIIIa 158V（His標簽） QRE-138 重組人FcγRIIIa 158F（His標簽）

QRE-139 重組人FcRn（His標簽） QRE-163 重組人CD38（Fc標簽）

QRE-164 重組人CD38（His標簽） QRE-165 重組小鼠FcRn（His標簽）

QRE-166 重組大鼠FcRn（His標簽） QRE-167 重組小鼠FcγRIIb（His標簽）

QRE-168 重組小鼠FcγRII（I His標簽） QRE-169 重組小鼠FcγRIV（His標簽）

QRE-180 重組兔FcRn QRE-181 重組豬FcRn

產(chǎn)品名稱

重組人Siglec-15蛋白（Camel Fc標簽）

QRE-101

貨號

重組人EGFR抗原（His標簽）

產(chǎn)品名稱

QRE-102

貨號

重組人VEGF抗原

QRE-103 重組人ErbB2抗原 QRE-104 Trastuzumab特異性抗原

QRE-105 Pertuzumab特異抗原 QRE-106 重組人VG1-Fc蛋白

QRE-108 重組人SIRPα抗原 QRE-109 重組人CD47抗原（mFc標簽）

QRE-110 重組人CD47抗原（hFc標簽） QRE-111 重組人Siglec-15蛋白（hFc標簽）

QRE-112 重組人Siglec-15蛋白（mFc標簽） QRE-113

QRE-114 重組人MERTK蛋白（His標簽） QRE-115 重組人KIR3DL3蛋白（His標簽）

QRE-116 重組人SIRP ECD蛋白（His標簽) QRE-117 重組人CD47 ECD蛋白（hFc標簽）

QRE-118 重組人FGL1 ECD蛋白（hFc標簽） QRE-119 重組人B7H4 ECD蛋白（hFc標簽）

QRE-120 重組人CTLA4 ECD蛋白（hFc標簽） QRE-121 重組人TIM3 ECD蛋白（hFc標簽）

產(chǎn)品名稱

QRE-196 重組人/猴/獼猴ROR1 (165-305,

Frizzled domain) 蛋白（His標簽） QRE-197 重組人Siglec-3 / CD33蛋白（His標簽）

QRE-194 重組人B7-1 / CD80蛋白（His標簽） QRE-195 重組人PLAU / uPA蛋白（His標簽）

QRE-198 重組人Nectin-2 / CD112蛋白（His標簽） QRE-199 重組人B7-H2 / ICOSLG蛋白（His標簽）

QRE-200 重組人GUCY2C / Guanylyl cyclase C

蛋白（His標簽） QRE-201 重組人促卵泡生成素抗原

QRE-202 重組人絨毛膜促性腺激素抗原 QRE-203 重組人促甲狀腺激素抗原

QRE-204 重組人促黃體生成激素抗原 QRE-205 長效人促卵泡刺激素

QRE-206 重組人LIGHT / TNFSF14蛋白（His標簽） QRE-207 重組人Siglec-10蛋白（His標簽）

貨號 產(chǎn)品名稱 貨號 產(chǎn)品名稱

QRE-192 重組生物素化人Mesothelin / MSLN

(296-580) 蛋白（His標簽） QRE-193 重組人CEACAM-5 / CD66e蛋白

（His標簽）

QRE-128 重組人CD24 ECD蛋白（hFc標簽） QRE-160 重組人siglec 7蛋白（hFc標簽）

QRE-161 重組人siglec 9蛋白（hFc標簽） QRE-162 重組人siglec 11蛋白（hFc標簽）

QRE-170 重組人Her2 / ErbB2蛋白（His標簽） QRE-171 重組人IL-2蛋白（His標簽）

QRE-174 重組人ErbB3 / Her3蛋白（ His標簽） QRE-175 重組人PCSK9蛋白（His標簽）

QRE-176 重組猴PCSK9蛋白（His標簽） QRE-177 重組人B7-2/CD86蛋白（His標簽）

QRE-178 重組人OX40 Ligand/TNFSF4蛋白

（His標簽） QRE-179 重組人OX40/TNFRSF4/CD134蛋白

（His標簽）

QRE-182 重組人TROP-2/TACSTD2蛋白

（His標簽） QRE-183 重組人Cathepsin B/CTSB蛋白

（His標簽）

QRE-172 重組人Mucin-1/

MUC-1（890-1158）蛋白（His標簽） QRE-173 重組人Mucin-1/

MUC-1 (1036-1155) 蛋白（His標簽）

QRE-184 重組人IL-2蛋白（Fc標簽） QRE-185 重組人Mucin-1 / MUC-1（33-167）

蛋白（Fc標簽）

QRE-186 重組人ErbB3 / Her3蛋白（Fc標簽） QRE-187 重組人Nectin-4蛋白（ His標簽）

QRE-188 重組猴Nectin-4蛋白（ His標簽） QRE-189 重組小鼠Nectin-4蛋白（ His標簽）

QRE-190 重組人CD4 / LEU3蛋白（His標簽） QRE-191 重組人/猴/獼猴ROR1蛋白（His標簽）

QRE-122 重組人IL-4Ra ECD蛋白（His標簽） QRE-123 重組人TIGIT ECD蛋白（hFc標簽）

QRE-124 重組人CD137 ECD蛋白（hFc標簽） QRE-125 重組人PD1 ECD蛋白（hFc標簽）

QRE-126 重組人siglec15 ECD蛋白（hFc標簽） QRE-127 重組人CD3e-CD3d二聚體

61 62

T

其他產(chǎn)品

RA-AD01

常用細胞培養(yǎng)試劑

ADCC Bioassay細胞穩(wěn)定劑

RA-AD02 G418

RA-AD03 潮霉素B（Hygromycin B）

RA-AD05 博來霉素（Zeocin）

RA-AD06 重組胰蛋白酶細胞消化液

貨號 產(chǎn)品名稱

CSFBS1500

血清

澳洲無菌胎牛血清

貨號 產(chǎn)品名稱

RA-BM12

培養(yǎng)基

DMEM/F12培養(yǎng)基，無酚紅

RA-BM11 RPMI 1640 培養(yǎng)基，無酚紅

貨號 產(chǎn)品名稱

抗體糖基化重塑是一種改變抗體分子上糖基化模式的技術(shù)。它的優(yōu)勢包括增強抗體的穩(wěn)定性、改善其藥

代動力學特性、增強其抗體依賴性細胞毒性（ADCC）活性等。這項技術(shù)在藥物研發(fā)和治療領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)

用，包括治療癌癥、自身免疫病和感染性疾病等。

人IgG糖鏈重塑和糖基偶聯(lián)是指對人類免疫球蛋白G（IgG）分子進行結(jié)構(gòu)或性質(zhì)的改變，或在其特定位

置引入化學團或官能團，以實現(xiàn)特定的功能或應(yīng)用。這種重塑或偶聯(lián)的意義在于擴展人IgG的應(yīng)用領(lǐng)域和功

能，提高其治療效果或生物活性。通過改變IgG的結(jié)構(gòu)或性質(zhì)，可以調(diào)控藥物傳遞性能、免疫活性、穩(wěn)定性

等，從而實現(xiàn)更好的治療效果或應(yīng)用效果。

定點糖鏈重塑及疊氮活化試劑盒

Rhinogen? TransCOUPER? 糖鏈重塑試劑盒可在幾個小時內(nèi)實現(xiàn)對天然人 IgG特定位點的糖鏈重塑，通

過酶重塑技術(shù)對抗體 Fc端的 N-聚糖進行轉(zhuǎn)糖基化，從而形成攜帶特定糖型的同源抗體池。如果需要去除核

心巖藻糖，可以選用Rhinogen? TransCOUPER? 去巖藻糖鏈重塑試劑盒。試劑盒可用于生成攜帶G0、G1、G2

或 G2S2 糖型的抗體。

NO.1糖鏈重塑

新品上線預(yù)告—Coming Soon！

圖A：Rhinogen? TransCOUPER? 糖鏈重塑試劑盒產(chǎn)品原理圖

圖B：Rhinogen? TransCOUPER? 去巖藻糖鏈重塑試劑盒產(chǎn)品原理圖

A

B

63 64

T

產(chǎn)品應(yīng)用

產(chǎn)品列表

應(yīng)用案例

巖藻糖分析

Rhinogen? TransCOUPER? 疊氮活化試劑盒可在人 IgG 的 Fc端的 N-糖基化位點上實現(xiàn)高效的特異性

位點連接。使用本試劑盒進行疊氮活化后，抗體可以用任意選擇的炔烴反應(yīng)型點擊試劑進行標記，標記度

（DOL）為每個抗體四個標記（DOL = 4）。

NO.2疊氮活化

Rhinogen? TransCOUPER? 糖鏈重塑試劑盒可用于人IgG與G0，G1，G2或G2S2糖型的糖鏈重塑；

Rhinogen? TransCOUPER? 去巖藻糖鏈重塑試劑盒可用于重塑人 IgG Fc端的N-聚糖，以獲得不含 α1-6

連接核心巖藻糖的同源糖型抗體；

Rhinogen? TransCOUPER? 疊氮活化試劑盒可用于對人 IgG 進行特定位點的疊氮活化。

圖C：Rhinogen? TransCOUPER? 疊氮活化試劑盒產(chǎn)品原理圖

C

TransCOUPER?

糖鏈重塑試vv劑盒

TransCOUPER?

Reshaping

lmmobilized EndoS2，Microspin

Glycosyltransferase

Protein A純化柱

Glycoform G0/G1/G2/G2S2

Glycosyltransferase

Protein A純化柱

Glycoform G0/G1/G2/G2S2

QPF-102 1kit

TransCOUPER?

去巖藻糖鏈重塑試劑盒

TransCOUPER?

Reshaping FUC

lmmobilized EndoS2&α1-6

Fucosidase，Microspin

QPF-103 1kit

TransCOUPER?

疊氮活化試劑盒

TransCOUPER?

Azoture ACT

lmmobilized EndoS2，Microspin

Glycosyltransferase

Protein A純化柱

Glycoform Azoture hIgG1&4/ hIgG2

QPF-104 1kit

中文名稱 商標名稱 貨號 試劑盒組分 規(guī)格 α1-2 Fucosidase

（α1-2巖藻糖苷酶） QPF-013-A α1-2 Fucosidase可催化水解糖蛋白或游離寡糖上α1-2 連接的

巖藻糖。

● 1000U

產(chǎn)品名稱 貨號 規(guī)格 產(chǎn)品信息

α1-2,4,6 Fucosidase

（α1-2,4,6 巖藻糖苷酶） QPF-014-A 100U

α1-2,4,6 Fucosidase可催化寡糖中α1-2、α1-4和α1-6末端

巖藻糖殘基的水解；

與其他鍵相比，可以更有效地切割α1-6巖藻糖殘基。

●

α1-3,4 Fucosidase

（α1-3,4 巖藻糖苷酶） QPF-015-A 50μl

α1-3,4 Fucosidase可有效識別 α1-3,4 巖藻糖基化聚糖（例如

Lewis X/A 表位，包括它們的唾液酸化對應(yīng)物）并水解這些底物

中的末端 α1-3和 α1-4巖藻糖基鍵，而無需去除唾液酸部分；

●

蛋白濃度

（μg/ml）

OD400

100

0.799

0

0.007

樣品名稱 RhinoBio 陰性對照

約200

0.305

進口品牌

β-N-Acetylhexosaminidase比進口品牌的

同款產(chǎn)品的酶活也要高很多，相同的酶使用

量及在相同的反應(yīng)條件下，反應(yīng)25min后，

我們400nm波長條件下的OD值為0.799，而進

口品牌的只有0.305。（相同的酶使用量，

相同的酶切體系及條件下，我們的實際使用

效果更好。）另外，從這個電泳圖上可以看

出，β-N-Acetylhexosaminidase產(chǎn)品的純

度更高，而進口品牌產(chǎn)品中有相當多雜條

帶，因此我們產(chǎn)品的純度更高。酶切位點